Slazdošanas metode antioksidanta aktivitātes noteikšanai. Diplomdarbs dihidrokvercetīna antioksidanta īpašības

1 Boļšakova L.S. viensMilentjevs V.N. 2Saņņikovs D.P. 3Kazmins V.M. 2

1 Oriolas Valsts ekonomikas un tirdzniecības institūts

2 Federālā valsts budžeta iestāde "Ķīmiskās apstrādes un lauksaimniecības radioloģijas centrs "Orlovsky"

3 Federālā valsts budžeta augstākās profesionālās izglītības iestāde "Valsts universitāte — izglītības, zinātnes un rūpniecības komplekss"

Tika pētīta iespēja izmantot hemiluminiscenci pārtikas vielu antioksidantu aktivitātes novērtēšanai. Piedāvātā metode ir balstīta uz luminola hemiluminiscenci sārmainā vidē, kuras intensitāte ir atkarīga no peroksīdu daudzuma hemiluminiscējošajā paraugā. Ķīmiluminiscence tika reģistrēta, izmantojot izstrādātu iestatījumu, kas satur dozēšanas sūkni, gaismas necaurlaidīgu kameru, stikla vakuuma fotopavairotāja cauruli un datorsistēmu. Lai uzlabotu hemiluminiscenci, luminolam tika pievienots kālija fericianīda šķīdums. Ķīmiluminiscences intensitātes izmaiņas tika reģistrētas analizējamā parauga ievadīšanas brīdī luminola šķīdumā. Kā analizējamais paraugs tika izmantots pienenes ekstrakts, kas iegūts ar sausu zemas temperatūras destilāciju. Tas satur fenola savienojumus, kas pazīstami ar savu augsto antioksidantu aktivitāti. Konstatēts, ka ar hemiluminiscences metodi var noteikt dažādu pārtikas savienojumu antioksidantu īpašības.

Bibliogrāfiskā saite

Paņičkins A.V., Boļšakova L.S., Milentjevs V.N., Saņņikovs D.P., Kazmins V.M. ĶĪMILISCENES IZMANTOŠANA UZTURVIELU ANTIOKSIDĀTO ĪPAŠĪBU NOVĒRTĒŠANAI // Racionāls uzturs, pārtikas piedevas un biostimulanti. - 2014. - Nr.6. - P. 36-37;
URL: http://journal-nutrition.ru/ru/article/view?id=283 (piekļuves datums: 17.12.2019.). Jūsu uzmanībai piedāvājam izdevniecības "Dabas vēstures akadēmija" izdotos žurnālus

], tomēr antioksidantu kā ķīmisko savienojumu definīcija nesniedz pilnīgu priekšstatu par pētāmā objekta aizsargājošajām īpašībām: tās nosaka ne tikai viena vai otra antioksidanta daudzums, bet arī katra no tiem aktivitāte. . Antioksidanta aktivitāte jeb antioksidanta aktivitāte, AOA, ir ātruma konstante antioksidanta reakcijai ar brīvo radikāli (kInH). Ķīmiluminiscences (CL) metode ļauj noteikt kopējo radikāļu daudzumu, ko antioksidanti saistās paraugā (kopējā antioksidanta kapacitāte, TAU), un, izmantojot CL kinētikas matemātiskās modelēšanas metodi, arī ģenēzes veidošanās un reakcijas ātrumu. radikāļi ar antioksidantiem, t.i., AOA [ , , ].

Visizplatītākā hemiluminiscences metodes modifikācija kopējās antioksidanta kapacitātes noteikšanai ir balstīta uz luminola izmantošanu kā hemiluminiscences aktivatoru [ , , , ]. Hemiluminometra kivetē ievieto paraugu, pievienojot luminolu, ūdeņraža peroksīdu un savienojumu, kas spontānas sadalīšanās (termolīzes) rezultātā spēj radīt radikāļus, piemēram, 2,2'-azobis-(2-amidinopropānu) dihidrohlorīds (ABAP): ABAP → 2R. Molekulārā skābekļa klātbūtnē alkilgrupa R veido peroksilgrupu ROO : R + O 2 → ROO . Tālāk peroksilgrupa oksidē hemiluminiscējošo zondi luminolu (LH 2 ), un veidojas luminola radikālis (LH ): ROO + LH 2 → ROOH + LH . No LH, veidojoties starpproduktiem (luminola hidroperoksīds un luminola endoperoksīds), elektroniski ierosinātā stāvoklī veidojas luminola oksidācijas galaprodukta aminoftalskābes molekula, kas izstaro fotonu, un rezultātā tiek novērota hemiluminiscence. . CL intensitāte ir proporcionāla fotonu ražošanas ātrumam, kas, savukārt, ir proporcionāls stacionārajai LH koncentrācijai sistēmā. Mijiedarbojoties ar radikāļiem, antioksidanti pārtrauc aprakstīto transformāciju ķēdi un novērš fotona veidošanos.

Termolīzei pakļautie savienojumi nav vienīgais iespējamais radikāļu avots, analizējot parauga antioksidantu spēju ar hemiluminiscences metodi. Alternatīvas ir sistēmas mārrutku peroksidāze-ūdeņraža peroksīds [, ], hemīns-ūdeņraža peroksīds, citohroms ar–kardiolipīns–ūdeņraža peroksīds uc Luminola oksidēšanās ar peroksidāzēm reakciju shēma aplūkota Kormjē et al. .

Šo sistēmu CL kinētiskās līknes atspoguļo divus reakcijas posmus: CL intensitātes palielināšanās stadiju un plato stadiju vai pakāpenisku luminiscences samazināšanos, kad CL intensitāte ir vai nu nemainīga, vai lēnām samazinās. Rakstā ir aprakstītas divas pieejas kopējās antioksidantu kapacitātes mērīšanai, kas ņem vērā šo līkņu iezīmi. TRAP (Total Reactive Antioxidant Potential) metode ir balstīta uz CL latentā perioda mērīšanu. τ un tos var izmantot, lai noteiktu antioksidantus, piemēram, troloksu vai askorbīnskābi: tiem ir raksturīga augsta reakcijas ātruma konstante ar radikāļiem, un šī iemesla dēļ tos var saukt par spēcīgiem antioksidantiem. Latentajā periodā notiek to pilnīga oksidēšanās. TAR metode (kopējā antioksidantu reaktivitāte) mēra hemiluminiscences slāpēšanas pakāpi. q hemiluminiscences līknes plato vai maksimumā: formula , kur I ir hemiluminiscences intensitāte bez antioksidanta, un I 1 ir CL intensitāte antioksidanta klātbūtnē. Šo metodi izmanto, ja sistēma satur pārsvarā vājus antioksidantus ar zemām mijiedarbības ar radikāļiem ātruma konstantēm – daudz zemākām salīdzinājumā ar luminola konstanti.

Antioksidantu darbību raksturo ne tikai rādītāji τ un q. Kā redzams no [ , ], tādu antioksidantu kā urīnskābes iedarbība hemin–H2O2–luminola vai tokoferola sistēmā, rutīns un kvercetīns citohromā. ar–kardiolipīns–H 2 O 2 –luminols, ko raksturo maksimālā CL pieauguma ātruma izmaiņas ( vmax). Kā liecina kinētikas matemātiskās modelēšanas rezultāti, šo antioksidantu mijiedarbības ar radikāļiem ātruma konstantu vērtības ir tuvas luminola konstantes vērtībai, tāpēc šādus antioksidantus var saukt par vidēja stipruma antioksidantiem.

Ja pētāmajā materiālā, jo īpaši augu izejvielās, būtu tikai viena veida antioksidanti, tad to saturu varētu raksturot ar vienu no trim iepriekš minētajiem rādītājiem ( τ , q vai vmax). Bet augu izejvielas satur dažāda stipruma antioksidantu maisījumu. Lai atrisinātu šo problēmu, daži autori [ , , , ] izmantoja ķīmiskās luminiscences gaismas summas izmaiņas noteiktā laikā ∆S, kas aprēķinātas pēc formulas , kur ∆ S0 un ∆ S S- CL gaismas summas uz noteiktu laiku t attiecīgi kontroles un testa paraugos. Laikam jābūt pietiekamam, lai visi sistēmā esošie antioksidanti oksidētos, tas ir, lai testa parauga CL līkne sasniegtu kontroles parauga CL līknes līmeni. Pēdējais liecina, ka pētniekiem ir ne tikai jāreģistrē luminiscences gaismas summa, bet arī jāreģistrē CL kinētikas līkne pietiekami ilgu laiku, kas ne vienmēr tiek darīts.

Tā kā visi izmērāmie rādītāji ir atkarīgi no ierīces un mērīšanas apstākļiem, vielas antioksidanta iedarbība pētāmajā sistēmā parasti tiek salīdzināta ar antioksidanta iedarbību, kas ņemta par standartu, piemēram, Trolox [ , ].

Lai analizētu augu materiālu kopējo antioksidantu spēju, daudzi autori izmantoja mārrutku peroksidāzes – ūdeņraža peroksīda sistēmu. Darbos [ , ] antioksidantu daudzuma noteikšanai paraugos tika izmantots CL latentais periods (TRAP metode), bet darbos [ , , ] laukums zem CL attīstības līknes. Taču uzskaitītie darbi nesniedz skaidru pamatojumu viena vai cita parametra izvēlei TAU novērtēšanai.

Pētījuma mērķis bija noskaidrot, kā dažāda veida antioksidantu attiecība ietekmē TAU, un modificēt hemiluminiscences metodi tā, lai varētu precīzāk noteikt TAU augu materiālos. Lai to paveiktu, esam sev izvirzījuši vairākus uzdevumus. Pirmkārt, salīdzināt pētāmo objektu CL kinētiku ar trīs veidu standarta antioksidantu (stipru, vidēju un vāju) kinētiku, lai saprastu, kura veida antioksidanti dod galveno ieguldījumu pētāmo objektu TAE. Otrkārt, aprēķināt pētāmo objektu TAU, izmērot CL gaismas summas samazināšanos šo objektu iedarbībā salīdzinājumā ar antioksidanta darbību, kas nodrošina vislielāko devumu TAU.

MATERIĀLI UN METODES

Pētījuma objekti bija a/s Krasnogorskleksredstva (Krievija) ražotie vilkābeļu, pīlādžu un mežrozīšu augļu rūpnieciskie paraugi, kā arī autoru Maskavas apgabalā dabiskās augšanas apstākļos ievāktie aveņu augļi, kas žāvēti 2. 60–80 ° C, līdz tie pārtrauc sulu un spiediena deformācijas.

Reaģenti antioksidantu kapacitātes analīzei ar hemiluminiscences metodi bija: KH 2 PO 4, 20 mM buferšķīdums (pH 7,4); peroksidāze no mārrutku saknēm (aktivitāte 112 U/mg, M = 44 173,9), 1 mM ūdens šķīdums; luminols (5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-1,4-ftalazindions, 3-aminoftalskābes hidrazīds, M=177,11), 1 mM ūdens šķīdums; ūdeņraža peroksīds (H 2 O 2, M = 34,01), 1 mM ūdens šķīdums; antioksidantu šķīdumi (askorbīnskābe, kvercetīns, tokoferols). Visus reaģentus ražoja Sigma Aldrich (ASV).

Vilkābeļu, pīlādžu un mežrozīšu augļu novārījumus un aveņu augļu uzlējumu gatavoja pēc PSRS Valsts farmakopejas metodoloģijas, kas noteikta vispārējā farmakopejas rakstā "Uzlējumi un novārījumi".

Kopējā antioksidanta kapacitāte tika noteikta, reģistrējot hemiluminiscenci Lum-100 hemiluminometrā (DISoft, Krievija), izmantojot PowerGraph 3.3 programmatūru. Lai noteiktu TAU augu izejvielās, 40 µl luminola koncentrācijā 1 mM, 40 µl mārrutku peroksidāzes koncentrācijā 0,1 µM, no 10 līdz 50 µl novārījuma vai uzlējuma (atkarībā no koncentrācijas) un fosfātu buferšķīdumu. tādā daudzumā, kas nepieciešams, lai kopējais parauga tilpums sasniegtu 1 ml. Kivete tika uzstādīta ierīcē un CL tika ierakstīta, novērojot fona signālu. Pēc 48 s pēc fona signāla reģistrācijas kivetei pievienoja 100 µl H2O2 koncentrācijā 1 mM, un CL reģistrāciju turpināja 10 minūtes. Tika sagatavoti četri paraugi ar atšķirīgu katra augu objekta koncentrāciju. CL tika reģistrēts arī askorbīnskābes, kvercetīna un tokoferola šķīdumiem piecās dažādās koncentrācijās katram antioksidantam. Pēc tam novārījumu un uzlējumu paraugu TAU tika pārrēķināts kvercetīnam.

Luminola, mārrutku peroksidāzes un ūdeņraža peroksīda koncentrācijas izvēlētas tā, lai saprātīgā laikā (ne vairāk kā 10 min.) noteiktu ārstniecības augu materiālu ūdens ekstraktu antioksidantu spēju. Šajā laikā antioksidantu askorbāta un flavonoīda kvercetīna (galveno augu materiālu antioksidantu) hemiluminiscences līknes sasniedza plato, kas norādīja uz pilnīgu antioksidantu iznīcināšanu sistēmā. Pētīto paraugu atšķaidījumi un standarta antioksidantu šķīdumu koncentrācijas (norādītas attēlu parakstos) tika atlasītas tā, lai visas CL kinētiskās līknes tiktu mērītas pie vienādas instrumenta jutības.

Antioksidanta kapacitāte tika aprēķināta no laukuma izmaiņām (∆ S) zem hemiluminiscences (gaismas summas) kinētiskās līknes, pievienojot vielu, kas satur antioksidantu. Šim nolūkam mēs skaitījām S0 sistēmai bez antioksidanta un atņem no tā laukumu S S raksturojot sistēmu, kurai pievienots antioksidants. ∆ vērtība S atkarīgs no hemiluminometra jutības un mērīšanas apstākļiem. Attiecība ∆ S/C V(kur C- pētāmā bioloģiskā materiāla koncentrācija kivetē, g/l, un V- kivetes tilpums, l) izsaka 1 g pētāmā materiāla, t.i., augu materiālu, antioksidanta kapacitāti.

Antioksidanta kapacitāte ∆ S A standarta antioksidanta, piemēram, kvercetīna, šķīdumu, kas ievietots tādā pašā reakcijas maisījuma tilpumā. Attiecība ∆ S A / C A V(kur C A- antioksidanta svara koncentrācija kivetē, g/l) izsaka antioksidanta spēju 1 g antioksidanta.

Katram standarta antioksidantam tika reģistrēts signāls no vairāku koncentrāciju šķīdumiem, lai pārliecinātos, ka aprēķini ir veikti lineāras attiecības robežās un iegūtie rezultāti ir reproducējami. Patiešām, tika iegūta lineāra atkarība (∆ S A = k A C A) signālu no koncentrācijas, no kuras aprēķināts stehiometriskais koeficients k A. Saskaņā ar Fišera kritēriju iegūtās vērtības standarta antioksidantiem k A statistiski nozīmīgi ar varbūtību 0,975. Pēc tam signāls no četrām koncentrācijām tika reģistrēts katram no četriem augu paraugiem, un visiem paraugiem signāla lineārā atkarība no koncentrācijas (∆ S = k C), ko izmantoja stehiometriskā koeficienta aprēķināšanai k. Ar varbūtību 0,975 (Fišera tests) augu paraugiem iegūtās k vērtības ir statistiski nozīmīgas. Augu materiāla kopējā antioksidanta kapacitāte standarta antioksidanta svara izteiksmē (mg%) tika noteikta, izmantojot formulu .

Vērtības tika uzrādītas kā vidējā aritmētiskā ± standarta novirze (M ± δ) pie p

PĒTĪJUMA REZULTĀTI

Ķīmiluminiscences kinētikas pētījums nātrija askorbāta klātbūtnē (1. att. Nātrija askorbāta ietekme uz hemiluminiscences kinētiku" data-note="Sistēmas komponentu koncentrācijas: luminols - 40 µM, mārrutku peroksidāze - 4 nM, ūdeņraža peroksīds - 100 µM. Līknes: 1 - kontroles paraugs; 2 - 0,05 µM; 3 - 0,10 µM; 4 - 0,15 µM; 5 - 0,2 µM; 6 - 0,25 µM nātrija askorbāts. antioksidantu raksturo latentais periods, kad CL tiek nospiests. Tas gandrīz pilnībā nomāc ir proporcionāls antioksidanta daudzumam sistēmā.Tajā pašā laikā nemainās ne CL līkņu slīpums, ne CL intensitāte uz plato Tas ir saistīts ar to, ka askorbīnskābe ir spēcīgs antioksidants, kas pārtver visus radikāļus. veidojas sistēmā, ieskaitot luminola radikāļus, un CL neattīstās, kamēr viss askorbāts nav oksidēts.

Citi pētnieki arī ir parādījuši, ka ķīmiskās analīzes rezultāti un TAU vērtība, kas noteikta ar hemiluminiscences metodi, bieži nesakrīt. Darbā peroksidāzes–luminola–ūdeņraža peroksīda sistēmā noteiktā kopējā antioksidanta kapacitāte korelē ar triterpēna savienojumu saturu. Taču šo pašu autoru darbos, kuros pētījuma objekts bija cits augs, korelācija starp TAU un kādas vielu grupas, tajā skaitā flavonoīdu, saturu netika novērota.

Šīs neatbilstības ir saistītas ar vismaz trim faktoriem. Pirmkārt, svarīga ir antioksidantu aktivitāte, t.i., to mijiedarbības ātrums ar radikāļiem, kas dažādiem antioksidantiem, kas veido augu paraugu, ir atšķirīgs. Pēc Izmailova teiktā, meksidola, tokoferola un kvercetīna attiecīgo reakciju ātruma konstantes ir saistītas kā 0,04: 2: 60. Otrkārt, katra antioksidanta molekula, nonākot ķīmiskā reakcijā, var pārtvert dažādu skaitu radikāļu. Saskaņā ar darbu kvercetīns, urīnskābe un askorbīnskābe pārtvēra attiecīgi 3,6 ± 0,1, 1,4 ± 0,1 un 0,5 ± 0,2 radikāļus uz vienu reaģējušo antioksidanta molekulu (izmantota hemin-H 2 O 2 sistēma – luminols). Treškārt, pētījuma rezultātus varētu ietekmēt peroksidāzes aktivitātes klātbūtne pašu augu paraugos, tāpat kā darbā, kā arī kalcija klātbūtne paraugos, kas, kā redzams darbā, spēj palielināt. mārrutku peroksidāzes aktivitāte noteiktos apstākļos. Tas parasti izraisa augstāku CL intensitāti plato nekā kontroles līknēs, ko mēs tomēr neievērojām.

Pirmais faktors krasi ierobežo tāda parametra izmantošanu kā gaismas summas izmaiņas, jo ķīmijluminiscences mērīšanas laikam jābūt garākam par visu testa paraugā esošo antioksidantu patēriņa laiku. Par šī brīža tuvošanos var spriest, tikai izmērot hemiluminiscences kinētiku. Turklāt vājo antioksidantu ieguldījums OAE ir krasi nenovērtēts, jo to pilnīgas oksidācijas laiks ir daudzkārt ilgāks par pieļaujamo mērīšanas laiku (10–20 min).

Vēl svarīgāks ir antioksidanta stehiometriskais koeficients. Radikāļu skaits n, ar to pārtverts, ir vienāds ar , kur ρ - stehiometriskais koeficients un ∆ m- antioksidanta koncentrācijas izmaiņas mērījuma laikā, mūsu gadījumā - testējamās vielas sākotnējā koncentrācija testa paraugā.

Mirdzuma gaismas summas atšķirība bez antioksidanta un tā klātbūtnē ir proporcionāla n. Kopējais pārtverto radikāļu skaits ir , kur ρi ir konkrēta antioksidanta stehiometriskais koeficients, un m i- tā koncentrācija mērījuma laikā. Kopējais pārtverto radikāļu skaits acīmredzami nav vienāds ar kopējo antioksidantu daudzumu, jo koeficienti ρi ir ne tikai vienādi ar vienotību, bet arī būtiski atšķiras dažādiem antioksidantiem.

Vērtība n ir proporcionāls gaismas summu starpībai, kas izmērīta noteiktā laika periodā starp paraugu, kas satur antioksidantu, un kontroles paraugu, kas nesatur antioksidantus: S = k n, kur k- koeficienta konstante tādos pašos mērīšanas apstākļos.

Rakstā aplūkotā metode ļauj noteikt kopējo antioksidantu kapacitāti, savukārt ķīmiskā analīze ļauj noteikt kopējo antioksidantu saturu produktā. Tāpēc šķiet, ka ķīmijluminiscences metode ir informatīvāka nekā ķīmiskā analīze.

Mūsu izvēlētie apstākļi, lai novērtētu augu izejvielu kopējo antioksidantu kapacitāti, reģistrējot hemiluminiscences kinētiku sistēmā, kas sastāv no mārrutku peroksidāzes, ūdeņraža peroksīda un luminola (komponentu koncentrācijas ir attiecīgi 4 nM, 100 μM un 40 μM; 20 mM fosfātu buferšķīdums, pH 7,4), nodrošināja spēcīgu antioksidantu (askorbīnskābes) un mērenu antioksidantu (kvercetīna) oksidēšanos 10 min. Šāds mērījumu ilgums ir ērts un nodrošina nepieciešamo mērījumu kvalitāti.

Ķīmiluminiscences kinētikas analīze parādīja, ka pētītajos objektos (pīlādžu, mežrozīšu, vilkābeļu augļu un aveņu augļu uzlējumu novārījumi) galvenie antioksidanti ir vidēja stipruma antioksidanti, tai skaitā flavonoīdi, un vājas stiprības antioksidanti (tokoferols u.c.). ). Pamatojoties uz hemiluminiscences gaismas summas samazināšanos, tika aprēķināta kopējā antioksidanta kapacitāte pētītajiem objektiem. Salīdzinot iegūtās TAU vērtības ar ķīmiskās analīzes rezultātiem, atklājās, ka produkti, kas satur vienādu daudzumu antioksidantu ar dažādām attiecībām, var atšķirties pēc spējas efektīvi aizsargāt organismu no brīvo radikāļu kaitīgās ietekmes. Aprakstītā tehnika ir daudzsološa augu objektu pētīšanai, kas satur dažādu antioksidantu maisījumu. Tajā pašā laikā to raksturo vienkāršība un zemas izpētes izmaksas. Apvienojot hemiluminiscences kinētikas mērījumus ar reakciju matemātisko modelēšanu, tiks ne tikai automatizēts TAU noteikšanas process, bet arī tiks noteikts atsevišķu antioksidantu grupu devums indeksā.

Izgudrojums attiecas uz pārtikas rūpniecību, un to var izmantot, lai noteiktu kopējo antioksidantu aktivitāti. Metode tiek veikta šādi: analizējamā viela mijiedarbojas ar reaģentu 0,006 M Fe(III) - 0,01 M o-fenantrolīns. Askorbīnskābe (AA) mijiedarbojas ar to pašu reaģentu, ko pievieno attiecībā 1:100. Pēc tam inkubē vismaz 90 minūtes un fotometrē pie 510 ± 20 nm. Pēc tam tiek noteikta analītiskā signāla vērtības atkarība no vielas daudzuma un aprēķināta kopējā AOA vērtība. Piedāvātā metode ļauj mazāk laikietilpīgāk un drošāk noteikt augu materiālu un pārtikas produktu kopējo antioksidantu aktivitāti, pamatojoties uz to. 2 w.p. f-ly, 1 ill., 5 tab.

Izgudrojums attiecas uz analītisko ķīmiju un var tikt izmantots, lai noteiktu kopējo antioksidantu aktivitāti (AOA) augu materiāliem un uz to balstītiem pārtikas produktiem.

Zināma kulonometriskā metode tējas kopējā AOA noteikšanai, kuras pamatā ir produkta ūdens ekstraktu mijiedarbība ar elektroģenerētiem broma savienojumiem (I.F. Abdulin, E.N. Turova, G.K. Budnikov Tējas ekstraktu antioksidanta kapacitātes kulonometriskais novērtējums ar elektroģenerētu bromu // Zhurn Ķīmija, 2001, 56. sēj., 6. nr., 627.–629. lpp.). Elektroģenerētu broma savienojumu kā titrantu izvēle ir saistīta ar to spēju iesaistīties dažādās reakcijās: radikālā, redoksā, elektrofīlā aizstāšanā un pievienošanā ar vairākām saitēm. Tas ļauj aptvert plašu bioloģiski aktīvo tējas savienojumu klāstu ar antioksidanta īpašībām. Metodes trūkumi ir iespēja bromēt ar vielām, kas nav antioksidanti, un iegūtās kopējās AOA vērtības izteiksme elektroenerģijas daudzuma vienībās (kC/100 g), kas apgrūtina novērtēšanu. rezultāti.

Zināma voltammetriskā metode kopējās antioksidanta aktivitātes noteikšanai pēc skābekļa elektroredukcijas strāvas relatīvajām izmaiņām potenciālu diapazonā no 0,0 līdz -0,6 V (rel. sat. c.s.e.) uz dzīvsudraba plēves elektroda (Pat. 2224997, Krievija IPC 7 G 01 N 33/01 Volametriskā metode antioksidantu kopējās aktivitātes noteikšanai / E. I. Korotkova, Yu. Šīs metodes trūkums ir blakus elektroķīmisko reakciju rašanās, kas samazina antioksidantu noteikšanas efektivitāti, kā rezultātā samazinās rezultātu ticamība.

Zināma metode profilaktisko un ārstniecisko antioksidantu kopējā AOA kontrolei lipīdu peroksidēšanai līdz malonaldehīdam ar spektrofotometrisko vai hemiluminiscences noteikšanu (Pat. 2182706, Krievija, IPC 7 G 01 N 33/15, 33/52. fondi / Pavļučenko I.I. Basov A.A., Fedosov S.R. - Nr.2001101389/14; pieteikums 15.01.2001.; public. 20.05.2002.). Tajā pašā laikā antioksidantu aktivitāte ir apgriezti proporcionāla lipīdu peroksidācijas produktu līmenim. Šīs metodes trūkumu var uzskatīt par ierobežotu analizējamo objektu klāstu, jo šādos apstākļos tiek noteikti tikai vienas grupas antioksidanti - lipīdi.

Zināma metode augu ekstrakta kopējā AOA noteikšanai, kas sastāv no ekstrakta inkubācijas ar linetolu un dzelzs (II) sulfātu, oksidācijas reakcijas ierosināšanu ar UV starojumu un sekojošu mijiedarbību ar tiobarbitūrskābi tritona X-100 klātbūtnē. Pieteikums 97111917/13, Krievija, IPC 6 G 01 N 33/00 Kopējās antioksidanta aktivitātes noteikšanas metode / Rogozhin VV - Appl. 08.07.1997; public. 10.06.1999). Veicot spektrofotometriju, izmanto etanola un hloroforma maisījumu attiecībā 7:3. Bioloģiskā materiāla AOA vērtību nosaka reakcijas produkta - malondialdehīda uzkrāšanās attiecība paraugā, kas satur ekstraktu, pret paraugu ar prooksidantu. Šīs metodes trūkums ir blakusreakciju iespējamība UV starojuma laikā, kas samazina analīzes rezultātu ticamību.

Uzskaitītajām kopējā AOA noteikšanas metodēm ir vairāki trūkumi: augsta darba intensitāte, zema ticamība, kopējā AOA izmērītā vērtība nav saistīta un nav salīdzināma ar nevienu parasto vielu.

Tuvākais analogs pieteiktajam izgudrojumam ir metode ārstniecības augu kopējā AOA noteikšanai, mērot ķīmisko luminiscenci, kas rodas, reaģējot ar luminolu oksidētāja ūdeņraža peroksīda klātbūtnē (M.Kh. canary grass by chemiluminescence // Journal of Analītiskā ķīmija, 2004, V.59, Nr. 1, P. 84-86). Kopējā AOA kvantitatīvā novērtējumam tika salīdzināta zāļu izejvielu ekstrakta reducējošā spēja un spēcīga antioksidanta - askorbīnskābes aktivitāte 25-110 μg apjomā. Salīdzinot ar iepriekš minētajām metodēm, prototipā kā oksidētājs tiek izmantots ūdeņraža peroksīds, kas mijiedarbojas ar plašu antioksidantu klāstu, un objekta kopējā AOA izmērītā vērtība tiek noteikta un izteikta attiecībā pret askorbīnskābi, kas ir kopīgs antioksidants, kas ļauj iegūt ticamus rezultātus, vienlaikus saglabājot citus trūkumus. Trūkumi ietver arī metodē izmantotā aprīkojuma sarežģītību.

Pieteiktā izgudrojuma tehniskais mērķis ir izstrādāt mazāk laikietilpīgu un uzticamu metodi augu materiālu un pārtikas produktu kopējās antioksidanta aktivitātes noteikšanai, pamatojoties uz to.

Tehniskās problēmas risināšanai tiek piedāvāts mijiedarboties ar analizējamo vielu ar reaģentu 0,006 M Fe (III) - 0,01 M o-fenantrolīnu un ar to pašu reaģentu askorbīnskābi (AA), ko pievieno proporcijā 1:100. , inkubē vismaz 90 minūtes, fotometrē pie 510 ± 20 nm, pēc tam nosaka analītiskā signāla atkarību no vielas daudzuma un aprēķina kopējo AOA. Jo īpaši aprēķinu var veikt saskaņā ar formulu (I), kas iegūta no kvantitatīvās atbilstības vienādojuma starp pētāmo objektu un askorbīnskābi:

kur a, b ir koeficienti regresijas vienādojumā analītiskā signāla atkarībai no AA daudzuma;

a", c" - koeficienti regresijas vienādojumā analītiskā signāla atkarībai no pētāmā objekta daudzuma;

x saule. - pētāmā reducētāja (parauga) masa, mg.

Piedāvātā reaģenta izmantošana šajos apstākļos ļāva paplašināt lineāro diapazonu un samazināt noteikto askorbīnskābes daudzumu apakšējo robežu. Piedāvātais būtisko pazīmju kopums ļauj, pamatojoties uz to, noteikt dažādu augu materiālu un pārtikas produktu kopējo AOA.

Kvantitatīvie atbilstības vienādojumi savieno analītiskā signāla atkarību no askorbīnskābes daudzuma un analītiskā signāla atkarību no pētāmā objekta daudzuma, ja antioksidanta aktivitāte ir vienāda.

Pēc analītiskā signāla lieluma fotometrisko mērījumu rezultātu apstrādes ar mazāko kvadrātu metodi (K. Derffel Statistika analītiskajā ķīmijā. - M .: "Mir", 1994. S. 164-169; A.K. Charykov Matemātiskā apstrāde ķīmiskās analīzes rezultāti - L .: Chemistry, 1984. S.137-144) šīs atkarības tika aprakstītas ar lineārās regresijas funkciju: y=ax+b, kur a ir regresijas koeficients, b ir brīvloceklis. Koeficients a regresijas vienādojumā ir vienāds ar taisnes slīpuma pieskari x asij; koeficients b - attālums pa y asi no sākuma (0,0) līdz pirmajam punktam (x 1 , y 1).

Koeficientus a un b aprēķina pēc formulas:

Regresijas vienādojumam AS atkarībai no askorbīnskābes daudzuma noteiktā laikā ir šāda forma:

y AK \u003d a x AK (mg) + b,

regresijas vienādojums AS atkarībai no pētāmā objekta daudzuma (reducējošais aģents):

y VOST \u003d a "x VOST (mg) + b",

kur AK, VOST ir fotometriskā šķīduma optiskais blīvums;

x AK (mg), x VOST (mg) - askorbīnskābes (reducētāja) koncentrācija šķīdumā;

tad, pielīdzinot funkciju vērtības, iegūstam formulu (I) pētāmā objekta antioksidanta aktivitātes aprēķināšanai askorbīnskābes daudzuma vienībās (mg).

Zīmējumā parādīta analītiskā signāla atkarība no reducētāja daudzuma.

Analizēto šķīdumu optiskais blīvums tika mērīts ar KFK-2MP fotoelektrisko kolorimetru.

Ir zināms (F. Umlands, A. Jasins, D. Tiriks, G. Vunšs Kompleksie savienojumi analītiskajā ķīmijā - M.: Mir, 1975. - 531 lpp.), ka o-fenantrolīns ar dzelzi veido ūdenī šķīstošu helātu ( II) sarkanoranža krāsa, kurai raksturīgs absorbcijas maksimums pie λ=512 nm. Tāpēc piedāvātajā metodē fotometrija tiek veikta pie λ=510±20 nm.

Reakcijā ievadītā reaģenta sastāva un tā daudzuma optimizācija tika veikta, pamatojoties uz eksperimenta daudzfaktoru plānošanas rezultātiem, izmantojot Latīņa kvadrāta metodi, kas sastāvēja no visu pētīto faktoru maiņas katrā eksperimentā, katra faktora līmenis tikai vienu reizi satiekas ar dažādiem citu faktoru līmeņiem. Tas ļauj identificēt un novērtēt katra pētāmā faktora radīto efektu atsevišķi.

Tika izmantoti šādi faktori: Fe (III), o-fenantrolīna daudzums un reakcijā ievadītā reaģenta tilpums. Faktoru kombinācijai jānodrošina plašs analītiskā signāla (AS) linearitātes diapazons ar pietiekamu jutību, no vienas puses, un reaģenta stabilitāti laika gaitā, no otras puses. Tas ļāva katram faktoram izdalīt šādus līmeņus:

Fe(III) daudzums: 0,003 M (A 1); 0,006 M (A 2); 0,009 M (A 3);

o-fenantrolīna daudzums: 0,01 M (B 1); 0,02 M (B 2); 0,03 M (B 3);

reaģenta tilpums: 0,5 ml (C 1); 1,0 ml (C 2); 2,0 ml (C 3) (1. tabula).

Lai izvēlētos optimālo faktoru līmeņu kombināciju, tika iegūtas AS kalibrēšanas atkarības no askorbīnskābes daudzuma diapazonā no 10 līdz 150 μg (kas nepieciešams, lai apstiprinātu funkcijas linearitāti), iegūtās atkarības regresijas vienādojums. aprēķina, un pēc tam AS vērtību noteiktā askorbīnskābes daudzumā (120 μg). Tādējādi katram reaģenta sastāvam (faktori A, B) tika izvēlēts tilpums (faktors C), pie kura maiņstrāvas vērtība ir maksimālā. Tas ļāva samazināt izskatāmo kombināciju skaitu līdz deviņām (2. tabula).

Salīdzinot kopējo AS katram līmenim, tika noteiktas summas ar maksimālo vērtību: ΣA 2 (0,991); ΣB 1 (1,066); ΣC 2 (1,361). Tas ļāva secināt, ka reaģenta sastāvs ir optimāls: 0,006 M Fe (III) - 0,01 M o-fenantrolīns ar tā tilpumu, kas ievadīts reakcijā, 1,0 ml uz 100 ml šķīduma.

Pie optimālās reaģenta koncentrācijas pētījām AS atkarības izmaiņas no askorbīnskābes un dažu dabas objektos izplatītu reducētāju (tanīna, rutīna, kvercetīna) koncentrācijas dažādos reakcijas maisījuma inkubācijas laikos (30, 60). , 90, 120 min). Konstatēts, ka visiem pētītajiem reducētājiem AS atkarība no to satura ir lineāra 10-150 μg robežās (skat. zīmējumu) un AS vērtība ir atkarīga no inkubācijas laika (3.tabula).

No zīmējuma redzams, ka maiņstrāvas izmaiņas rutīna ietekmē ir nenozīmīgas, tanīns tuvojas, un kvercetīns pārsniedz to pašu atkarību no askorbīnskābes. Apsverot maiņstrāvas izmaiņas no inkubācijas laika visiem pētītajiem reducētājiem (3. tabula), tika konstatēts, ka analītiskā signāla stabilizācija laika gaitā ir novērojama no 90 minūtēm.

3. tabula Reducējošo vielu AS izmaiņas laika gaitā
Testējamā viela	m vielu, mg/cm3	Analītiskais signāls
Testējamā viela	m vielu, mg/cm3	Reakcijas maisījuma inkubācijas laiks, min
30	60	90	120
C vitamīns	10	0,038	0,042	0,044	0,044
100	0,340	0,352	0,360	0,363
Tanīns	10	0,029	0,037	0,042	0,043
100	0,280	0,295	0,303	0,308
Rutins	10	0,013	0,016	0,019	0,019
100	0,150	0,166	0,172	0,175
Kvercetīns	10	0,031	0,044	0,051	0,053
100	0,420	0,431	0,438	0,442

Lai pierādītu noteiktās AOA vērtības summēšanas raksturu, tika pētīta reaģenta Fe (III) - o-fenantrolīna ietekme uz modeļu šķīdumiem, kas ietvēra reducējošos līdzekļus: tanīnu, rutīnu, kvercetīnu un askorbīnskābi dažādās attiecībās. 4. tabulā parādīti modeļu maisījumu analīzes rezultāti.

4. tabula Modeļu maisījumu analīzes rezultāti (P=0,95; n=3)
Komponentu skaits maisījumā	Kopējais AOA, aprēķināts, mcgAA	Kopējais AOA, atrasts, mcgAA
ieviests	Kopējais AOA, aprēķināts, mcgAA	Kopējais AOA, atrasts, mcgAA	AK ziņā
AK	Tanīns	Rutins	Kvercetīns	AK	Tanīns	Rutins	Kvercetīns
-	20	20	20	-	16,77	9,56	32,73	59,06	57,08
-	10	10	10	-	8,35	4,77	16,41	29,53	26,95
-	50	10	10	-	42,02	4,77	16,41	63,20	55,04
-	10	50	10	-	8,35	23,93	16,41	48,69	50,06
-	10	10	50	-	8,35	4,77	81,70	94,82	91,61
-	30	10	10	-	25,19	4,77	16,41	46,37	39,24
-	10	30	30	-	8,35	14,35	49,06	71,76	73,47
20	20	20	20	20	16,77	9,56	32,73	79,06	96,29
50	10	10	10	50	8,35	4,77	16,41	87,95	93,07
10	50	10	10	10	42,02	4,77	16,41	73,20	78,15
10	10	50	10	10	8,35	23,93	16,41	58,69	78,74
10	10	10	50	10	8,35	4,77	81,70	104,82	121,45
30	30	10	10	30	25,19	4,77	16,41	76,37	84,59
10	10	30	30	10	8,35	14,35	49,06	81,76	103,31

Kopējā AOA teorētiskās vērtības aprēķins veikts pēc kvantitatīvās atbilstības vienādojumiem, kas raksturo pētāmā reducētāja antioksidanta spēju attiecībā pret askorbīnskābi, vienādas antioksidanta aktivitātes apstākļos: .

Eksperimentālā (atrasts) AOA vērtība tika aprēķināta, izmantojot vidējo regresijas vienādojumu AS atkarībai no askorbīnskābes daudzuma. No 4. tabulā sniegtajiem rezultātiem var redzēt, ka eksperimentāli iegūtās AOA vērtības apmierinoši sakrīt ar teorētiski aprēķinātajām.

Tādējādi noteiktā AOA vērtība ir summārais rādītājs, un tās vērtības noteikšana, izmantojot kvantitatīvās atbilstības vienādojumus, ir pareiza.

Piedāvātā metode ir pārbaudīta uz reāliem paraugiem. Lai noteiktu reālā parauga vai tā ekstrakta kopējo AOA, tika iegūtas AS kalibrēšanas atkarības no analizējamās vielas un askorbīnskābes daudzuma reakcijas maisījuma inkubācijas laikā vismaz 90 minūtes. Kopējā AOA aprēķināšana tika veikta saskaņā ar formulu (I) un izteikta askorbīnskābes mg uz gramu testa objekta (mgAA/g).

Lai apstiprinātu piedāvātās metodes pareizību, šie paraugi tika pārbaudīti pēc zināmām metodēm, novērtējot askorbīnskābes saturu (GOST 24556-89 Augļu un dārzeņu pārstrādes produkti. C vitamīna noteikšanas metodes) un dominējošos reducējošos līdzekļus: tējā. - tanīns (GOST 19885-74 Tēja. Tanīna un kofeīna satura noteikšanas metodes), mežrozīšu augļos - organisko skābju daudzums (GOST 1994-93 Mežrozīšu. Specifikācijas) (5. tabula).

absolventu darbs

1.4. Antioksidantu izpētes metodes

antioksidantu aktivitāti klasificē: pēc manifestētā AOA reģistrācijas metodēm (tilpuma, fotometriskā, hemiluminiscējošā, fluorescējošā, elektroķīmiskā); pēc oksidācijas avota veida; pēc oksidētā savienojuma veida; saskaņā ar oksidētā savienojuma mērīšanas metodi.

Tomēr vispazīstamākās metodes antioksidantu aktivitātes noteikšanai ir:

1 TEAC (troloksa ekvivalenta antioksidanta jauda): metodes pamatā ir šāda reakcija:

Metmioglobīns + H 2 O 2 > Ferilglobīns + ABTS > ABTS * + AO.

Trolox ekvivalences metode (TEAC) ir balstīta uz antioksidantu spēju reducēt 2,2-azinobisa radikāļu katjonus (ABTS) un tādējādi kavēt absorbciju spektra garajā viļņa garuma daļā (600 nm). Būtisks metodes trūkums ir divpakāpju reakcija radikāļa iegūšanai. Tas pagarina analīzes laiku un var palielināt rezultātu izkliedi, neskatoties uz to, ka analīzei tiek izmantots standartizēts reaģentu komplekts.

2 FRAP (dzelzs reducējošais antioksidants): metodes pamatā ir šāda reakcija:

Fe(III)-Tripiridiltriazīns+AO>Fe(II)-Tripiridiltriazīns.

Dzelzs reducējošā/antioksidanta spēja (FRAP). Šeit tiek izmantota Fe(III)-tripiridiltriazīna reducēšanas reakcija uz Fe(II)-tripiridiltriazīnu. Tomēr šī metode nevar noteikt dažus antioksidantus, piemēram, glutationu. Šī metode ļauj tieši noteikt zemas molekulmasas antioksidantus. Pie zema pH Fe (III) tripiridiltriazīna kompleksa samazināšanos līdz Fe (II) kompleksam pavada intensīvi zila krāsa. Mērījumu pamatā ir antioksidantu spēja nomākt reakcijas maisījumā radušos reakcijas daļiņu oksidatīvo efektu. Šī metode ir vienkārša, ātra un zemas izpildes izmaksas.

3 ORAC (skābekļa radikāļu absorbcijas spēja): metodes pamatā ir šāda reakcija:

Fe (II) + H 2 O 2 > Fe (III) + OH * + AO> OH * + Luminol.

Skābekļa radikāļu (ORAC) absorbcijas spējas noteikšana. Šajā metodē tiek reģistrēta substrāta (fikoeritrīna vai fluoresceīna) fluorescence, kas rodas tā mijiedarbības ar ROS rezultātā. Ja testa paraugā ir antioksidanti, tad salīdzinājumā ar kontroles paraugu tiek novērota fluorescences samazināšanās. Šo metodi sākotnēji izstrādāja Dr. Guohua Cao Nacionālajā novecošanas institūtā 1992. gadā. 1996. gadā Dr. Cao pievienojās Dr. Ronaldam Pjēram apvienotajā grupā USDA Novecošanas pētniecības centrā, kur tika izmantota pusautomātiska metode. izstrādāta.

4 TRAP (kopējais radikāļu slazdošanas antioksidanta parametrs): metodes pamatā ir šāda reakcija:

AAPH+AO>AAPH* + PL (PE).

Šī metode izmanto antioksidantu spēju mijiedarboties ar peroksilradikāļu 2,2-azobis(2-amidinopropāna) dihidrohlorīdu (AAPH). TRAP modifikācijas ietver metodes analītiskā signāla reģistrēšanai. Visbiežāk analīzes beigu posmā AAPH peroksiradikālis mijiedarbojas ar luminiscējošu (luminolu), fluorescējošu (dihlorfluorescīna diacetāts, DCFH-DA) vai citu optiski aktīvu substrātu.

Ūdenī šķīstošais E vitamīna atvasinājums Trolox (6-hidroksi-2,5,7,8-tetrametilhromāns-2-karbonskābe) tiek izmantots kā standarts TEAC, ORAC un TRAP metodēm.

Pēdējā laikā pieaug interese par elektroķīmisko metožu izmantošanu antioksidantu aktivitātes novērtēšanai. Šīs metodes ir ļoti jutīgas un ātras.

Dažu pārtikas produktu antioksidantu aktivitātes novērtējums tiek veikts ar potenciometrijas metodi, pamatojoties uz antioksidantu īpašību izmantošanu piedalīties redoksreakcijās enola (-OH) un sulfhidril (-SH) grupu ietekmē.

Šķīdumu antioksidantu īpašību noteikšana balstās uz antioksidantu ķīmisko mijiedarbību ar mediatoru sistēmu, kas izraisa tā redokspotenciāla izmaiņas. Elektroķīmiskā šūna ir tvertne, kurā ir K-Na-fosfāta buferšķīdums, Fe(III)/Fe(II) mediatora sistēma un komplekss elektrods pirms redokspotenciāla mērīšanas. Antioksidantu aktivitāte tiek lēsta g-ekv/l.

Amperometriskā metode antioksidanta aktivitātes noteikšanai ir balstīta uz elektriskās strāvas mērīšanu, kas rodas pārbaudāmās vielas oksidēšanās laikā uz darba elektroda virsmas, kas ir zem noteikta potenciāla. Amperometriskās metodes jutīgumu nosaka gan darba elektroda raksturs, gan tam pielietotais potenciāls. Polifenolu, flavonoīdu amperometriskā detektora noteikšanas robeža ir nanopikogrammu līmenī, pie tik zemām koncentrācijām ir mazāka iespējamība dažādu antioksidantu savstarpējai ietekmei to kopīgajā klātbūtnē, jo īpaši sinerģisma fenomena izpausmei. . Metodes trūkumi ietver tās specifiku: šādos apstākļos nevar analizēt antioksidantus, kas paši oksidējas vai reducējas skābekļa elektroredukcijas potenciālu reģionā. Metodes priekšrocības ietver tās ātrumu, prostatu un jutīgumu.

Galvanostatiskās kulometrijas metode, izmantojot elektroģenerētus oksidētājus - metode ir piemērojama taukos šķīstošo antioksidantu analīzei.

Askorbīnskābes noteikšanai ir izstrādātas dažādas metodes:

amperometriskā metode, izmantojot alumīnija elektrodu, kas modificēts ar niķeļa(II)heksacianoferāta plēvi ar vienkāršu šķīduma iegremdēšanas metodi;

metode askorbīnskābes cietās fāzes spektrofotometriskai un vizuālai testa noteikšanai, izmantojot ar Vāvela reaģentu modificētu silīcijskābes kserogelu un kā indikatorpulveri varu (II);

askorbīnskābes hemiluminiscences noteikšanu var veikt ar plūsmas-injekcijas metodi saskaņā ar rodamīna B hemiluminiscējošu reakciju ar cēriju (IV) sērskābes vidē.

askorbīnskābes noteikšana diapazonā no 10 -8 -10 -3 g/cm 3 ar anodisko voltammetriju ūdens un ūdens-organiskā vidē.

Visizplatītākā ir FRAP metode, jo tā ir izteikta, ļoti jutīga. Pēdējo desmitgažu laikā ir izstrādāts liels skaits metožu veidu antioksidantu aktivitātes noteikšanai ar FRAP metodi (1. tabula).

1. tabula FRAP metodes izstrāde un pielietojums dažādu objektu antioksidantu aktivitātes noteikšanai

	Analīzes objekti	Piezīmes
	asins plazma	t = 4 min. Tika pētīta reakcijas stehiometrija un aditivitāte.
	Tēja, vīns	AOA noteikšana polifenolu dēļ
		Tiek salīdzinātas dažādu veidu tējas AOA vērtības
Pulido, Bravo, Saura-Kaliksto	Modeļu risinājumi	t=30 min. Tika atklāta neūdens šķīdinātāja ietekme
	Augi
	asinis, audi	PIA metode. Tika pārbaudīta svešu vielu ietekme.
Firuzi, Lacanna, Petrucci u.c.	Modeļu risinājumi	Tika pētīta dažādu AO noteikšanas jutība atkarībā no to struktūras un redokspotenciāla.
Kataliničs, Milošs,	Dažādi vīni
Temerdaševs, Tsjupko un citi.	Modeļu maisījumi
Loginova, Konovalova	Zāles. Preparāti	pārbaudes metode
Temerdaševs, Tsjupko un citi.	Sarkanie sausie vīni	AOA korelācija ar citiem vīna kvalitātes rādītājiem
1. tabula turpinājās
	Modeļu maisījumi	Dažādu AO noteikšanas jutība
Veršinins, Vlasova, Ciupko	Modeļu maisījumi	Tika atklāta signāla nesaskaitāmība ar oksidētāja trūkumu
Aņisimovičs, Deineka un citi.	Modeļu risinājumi	Tiek piedāvāti kinētiskie parametri AOA novērtēšanai.

Piezīmes: parasti marķētas: FIA plūsmas injekcijas analīze, TPTZ-tripiridiltriazīns, DIP-2,2, -dipiridils, PHEN-o-fenantrolīns, DPA-piridīndikarbonskābe, FZ-ferozīns, AA-askorbīnskābe, CT-katehols, t - ekspozīcijas laiks, min.

Olbaltumvielu un polielektrolītu mijiedarbība ūdens šķīdumos

Proteīna-polielektrolītu kompleksu raksturošanai tiek izmantotas dažādas analīzes metodes. Instrumentālās metodes sniedz informāciju par strukturālajām un optiskajām īpašībām, kā arī nosaka PEC saistīšanās dinamiku un raksturu...

D-metāla savienojumu ietekme uz ūdens molekulas disociācijas ātrumu bipolārā membrānā

Jaunu BPM sintezēšanas procesā liela uzmanība jāpievērš iegūto paraugu īpašību izpētei turpmākai sintēzes apstākļu izvēlei, kas nodrošina sintezējamo membrānu elektroķīmisko īpašību uzlabošanu...

Dizaineru narkotikas un sintētiskie kanabinoīdi

Sintētisko kanabinoīdu noteikšanu augu maisījumos var veikt ar dažādām fizikāli ķīmiskām metodēm, piemēram, gāzu hromatogrāfiju-masas spektrometriju, gāzes, plānslāņa un augstas izšķirtspējas šķidruma hromatogrāfiju...

Metodes izstrāde flavonoīdu noteikšanai ārstniecības augu materiālos

Hinolinonu sintēze un farmakoloģiskās īpašības-2

Pētījuma objekts: Hinolinons-2. Pētījuma metode: Izmantojot datorprogrammu "Marvin JS", tika izveidota vielas struktūra. Pēc tam viņa tika nosūtīta uz vietni "http://www.way2drug.com/PASSOnline/predict.php" turpmākai izmeklēšanai...

Termospektrālā metode epoksīda polimēra iztvaikošanas produktu izpētei

Tehnoloģija ļoti attīrīta hitozāna iegūšanai no vēžveidīgo čaumalām

Hitozāna molekulmasas noteikšana Hitozāna molekulmasu noteica viskozimetriski saskaņā ar standarta procedūru. Šķīdumus ar koncentrāciju 0,05 un 0,5 g/dl pagatavoja, izšķīdinot nosvērtu polimēra pulvera daļu acetāta buferšķīdumā (0...

Dabas parka teritorijas fiziskais un ģeogrāfiskais raksturojums

Atslēgvārdi

brīvais radikālis/antioksidants/ antioksidanta aktivitāte / kopējā antioksidanta spēja / hemiluminiscence/ luminols / brīvais radikālis / antioksidants / antioksidanta aktivitāte / kopējā antioksidanta kapacitāte / hemiluminescence / luminols

anotācija zinātnisks raksts par ķīmijas zinātnēm, zinātniskā raksta autors - Georgijs Konstantinovičs Vladimirovs, E. V. Sergunova, D. Ju. Izmailovs, Ju. A. Vladimirovs

Ārstniecības augu materiāli ir viens no cilvēka ķermeņa antioksidantu avotiem. Starp metodēm antioksidantu satura noteikšanai augu objektos plaši izplatīta ir hemiluminiscences analīzes metode. Šajā darbā tas tika izmantots, lai novērtētu kopējā antioksidanta spēja(OAU) pīlādžu, mežrozīšu un vilkābeļu augļu novārījumi un aveņu augļu uzlējums. Eksperimentā tika reģistrēta kinētika hemiluminiscence sistēmā, kas sastāv no mārrutku peroksidāzes, ūdeņraža peroksīda un luminola. Sistēmas komponentu koncentrācijas un tilpumi paraugā tika izvēlēti tā, lai spēcīgi antioksidanti (askorbīnskābe) un vidēji spēcīgi antioksidanti (kvercetīns) mērījumu laikā (10 min) tiktu pilnībā oksidēti. Ir ierosināta un pamatota metode TAU aprēķināšanai, pamatojoties uz gaismas summas izmaiņām. hemiluminiscence augu paraugu klātbūtnē. Kinētiskā analīze hemiluminiscence parādīja, ka pētītajos objektos dominē vidēja stipruma antioksidanti, tai skaitā flavonoīdi, un vāji antioksidanti (tokoferols u.c.). Salīdzinot pētāmo objektu aprēķinātās TAU vērtības un to ķīmiskās analīzes datus, atklājās, ka produkti, kas satur vienādu daudzumu antioksidantu ar atšķirīgām attiecībām pa veidiem, var atšķirties pēc spējas aizsargāt organismu no brīvo radikāļu kaitīgās ietekmes. Aprakstītais paņēmiens ir daudzsološs, lai pētītu augu objektus, kas satur dažādu veidu antioksidantu maisījumu.

Saistītās tēmas zinātniskie darbi ķīmijas zinātnēs, zinātniskā darba autors - Georgijs Konstantinovičs Vladimirovs, E. V. Sergunova, D. Ju. Izmailovs, Ju. A. Vladimirovs

2016 / Georgijs Vladimirovs, Sergunova E.V., Izmaylov D.Yu., Vladimirov Yu.A.
Antioksidantu noteikšana ar aktivētu hemiluminiscenci, izmantojot 2,2"-azo-bis(2-amidinopropānu)
2012 / Aleksejevs A.V., Proskurnina E.V., Vladimirovs Yu.A.
Dihidrokvercetīna un rutīna antioksidanta iedarbība peroksidāzes reakcijās, ko katalizē citohroms c
2008 / Demins E.M., Proskurnina E.V., Vladimirovs Yu.A.
Bioloģisko substrātu oksidatīvās un antioksidanta spējas novērtējums ar Fentona reakcijas izraisīto hemiluminiscenci
2016 / Piskarevs Igors Mihailovičs, I.P. Ivanova
Lipohidroperoksīdu satura noteikšana asins seruma lipoproteīnos, izmantojot mikroperoksidāzes-luminola sistēmu
2011 / Teselkins Jurijs Oļegovičs, Babenkova Irina Vladimirovna
Antioksidantu izpētes metodes
2004 / Khasanov V. V., Ryzhova G. L., Maltseva E. V.
Tuvas etnomedicīnā izmantoto augu antioksidanta aktivitāte
2012 / Chekhani N.R., Teselkin Yu.O., Pavlova L.A., Kozin S.V., Lyubitsky O.B.
Fosprenila antioksidantu īpašību izpēte dažādās bioloģisko testu sistēmās
2017 / A. V. Sanin, A. N. Narovlyansky, A. V. Pronin, T. N. Koževņikova, V. Yu. Sanina, A. D. Agafonova
Dažādu polihlorbifenilu devu ietekme uz spontānas un imūnglobulīna izraisītas luminola atkarīgās hemiluminiscences stāvokli asinīs
2016 / Gabdulkhakova I.R., Kayumova A.F., Samohodova O.V.
Antioksidantu aizsardzības lipīdu peroksidācijas sistēmas novērtējums bērniem ar esenciālu arteriālo hipertensiju, izmantojot spektrofotometrijas un hemiluminiscences metodes
2014 / Natjaganova Larisa Viktorovna, Gavrilova Oksana Aleksandrovna, Koļesņikova Larisa Romanovna

Kopējās antioksidantu kapacitātes hemiluminescenta noteikšana ārstniecības augu materiālā

Ārstniecības augu materiāls ir viens no cilvēka ķermeņa antioksidantu avotiem. Ķīmiluminiscences analīze ir viena no izplatītākajām metodēm antioksidantu satura noteikšanai augu materiālos. Mūsu darbā tika izmantota ķīmiskā luminiscences analīze, lai noteiktu kopējo antioksidantu kapacitāti (TAC) pīlādžu, rožu un vilkābeļu augļu novārījumiem, kā arī aveņu augļu uzlējumam. Eksperimenti noteica ķīmiskās luminiscences kinētiku sistēmā, kas sastāv no mārrutku peroksidāzes, ūdeņraža peroksīda un luminola. Sistēmas komponentu koncentrācijas un tilpumi tika izvēlēti tādi, lai spēcīgi antioksidanti (askorbīnskābe) un vidēja spēka antioksidanti (kvercetīns) mērījumu laikā (10 minūtes) tiktu pilnībā oksidēti. Tika piedāvāta un pamatota KPN aprēķināšanas metode, kuras pamatā ir ķīmiskās luminiscences gaismas summas izmaiņas augu paraugu klātbūtnē. Ķīmiluminiscences kinētikas analīze parādīja, ka pētītajos objektos dominē vidēja spēka antioksidanti, tostarp flavonoīdi un vāji antioksidanti (tokoferols un citi). Salīdzinot pētāmo objektu aprēķinātās KPN vērtības un to ķīmiskās analīzes datus, atklājās, ka produktiem, kas satur vienādu daudzumu antioksidantu ar atšķirīgām antioksidantu attiecībām pa veidiem, var atšķirties spēja aizsargāt organismu pret brīvo radikāļu kaitīgo ietekmi. . Aprakstītais paņēmiens ir daudzsološs, lai pētītu augu objektus, kas satur dažādu veidu antioksidantu maisījumus.

Zinātniskā darba teksts par tēmu "Ķīmiluminiscences metode kopējās antioksidanta kapacitātes noteikšanai ārstniecības augu materiālos"

hemiluminiscences metode kopējās antioksidanta kapacitātes noteikšanai ārstniecības augu materiālos

G. K. Vladimirovs1^, E. V. Sergunova2, D. Ju. Izmailovs1, Ju. A. Vladimirovs1

1 Medicīnas biofizikas katedra, Fundamentālās medicīnas fakultāte, Lomonosova Maskavas Valsts universitāte, Maskava

2 Farmācijas fakultātes Farmakognozijas katedra,

I. M. Sečenovs Pirmā Maskavas Valsts medicīnas universitāte, Maskava

Ārstniecības augu materiāli ir viens no cilvēka ķermeņa antioksidantu avotiem. Starp metodēm antioksidantu satura noteikšanai augu objektos plaši izplatīta ir hemiluminiscences analīzes metode. Šajā darbā tas tika izmantots, lai novērtētu pīlādžu, mežrozīšu un vilkābeļu augļu novārījumu un aveņu augļu uzlējuma kopējo antioksidantu kapacitāti (TOA). Eksperimentā hemiluminiscences kinētika tika reģistrēta sistēmā, kas sastāv no mārrutku peroksidāzes, ūdeņraža peroksīda un luminola. Sistēmas komponentu koncentrācijas un tilpumi paraugā tika izvēlēti tā, lai spēcīgi antioksidanti (askorbīnskābe) un vidēji spēcīgi antioksidanti (kvercetīns) mērījumu laikā (10 min) tiktu pilnībā oksidēti. Piedāvāta un pamatota metode RAE aprēķināšanai, pamatojoties uz ķīmiskās luminiscences gaismas summas izmaiņām augu paraugu klātbūtnē. Ķīmiluminiscences kinētikas analīze parādīja, ka pētītajos objektos dominē vidēji spēcīgi antioksidanti, tai skaitā flavonoīdi, un vāji antioksidanti (tokoferols uc). Salīdzinot pētāmo objektu aprēķinātās TAU vērtības un to ķīmiskās analīzes datus, atklājās, ka produkti, kas satur vienādu daudzumu antioksidantu ar atšķirīgām attiecībām pa veidiem, var atšķirties pēc spējas aizsargāt organismu no brīvo radikāļu kaitīgās ietekmes. Aprakstītais paņēmiens ir daudzsološs, lai pētītu augu objektus, kas satur dažādu veidu antioksidantu maisījumu.

Atslēgas vārdi: brīvie radikāļi, antioksidants, antioksidanta aktivitāte, kopējā antioksidanta kapacitāte, hemiluminiscence, luminols

Finansējums: Šo darbu atbalstīja Krievijas Zinātnes fonds, grants Nr.14-15-00375.

Ex3 Jārisina sarakste: Georgijs Konstantinovičs Vladimirovs

119192, Maskava, Lomonosovska pr-t, 31, korpuss 5; [aizsargāts ar e-pastu]

Raksts saņemts: 10.03.2016 Raksts pieņemts publicēšanai: 18.03.2016

ārstniecības augu materiālā kopējās antioksidanta kapacitātes hemiluminescentā noteikšana

1 Medicīnas biofizikas katedra, Fundamentālās medicīnas fakultāte, Lomonosova Maskavas Valsts universitāte, Maskava, Krievija

2 Farmācijas fakultātes Farmakognozijas katedra,

Pirmā Sečenova Maskavas Valsts medicīnas universitāte, Maskava, Krievija

Ārstniecības augu materiāls ir viens no cilvēka ķermeņa antioksidantu avotiem. Ķīmiluminiscences analīze ir viena no izplatītākajām metodēm antioksidantu satura noteikšanai augu materiālos. Mūsu darbā tika izmantota ķīmiskā luminiscences analīze, lai noteiktu kopējo antioksidantu kapacitāti (TAC) pīlādžu, rožu un vilkābeļu augļu novārījumiem, kā arī aveņu augļu uzlējumam. Eksperimenti noteica hemiluminiscences kinētiku sistēmā, kas sastāv no mārrutku peroksidāzes, ūdeņraža peroksīda un luminola. Sistēmas komponentu koncentrācijas un tilpumi tika izvēlēti tādi, lai spēcīgi antioksidanti (askorbīnskābe) un vidēja spēka antioksidanti (kvercetīns) mērījumu laikā (10 minūtes) tiktu pilnībā oksidēti. Tika piedāvāta un pamatota KPN aprēķināšanas metode, kuras pamatā ir ķīmiskās luminiscences gaismas summas izmaiņas augu paraugu klātbūtnē. Ķīmiluminiscences kinētikas analīze parādīja, ka pētītajos objektos dominē vidēja spēka antioksidanti, tostarp flavonoīdi un vāji antioksidanti (tokoferols un citi). Salīdzinot pētāmo objektu aprēķinātās KPN vērtības un to ķīmiskās analīzes datus, atklājās, ka produktiem, kas satur vienādu daudzumu antioksidantu ar atšķirīgām antioksidantu attiecībām pa veidiem, var atšķirties spēja aizsargāt organismu pret brīvo radikāļu kaitīgo ietekmi. . Aprakstītais paņēmiens ir daudzsološs, lai pētītu augu objektus, kas satur dažādu veidu antioksidantu maisījumus.

Atslēgas vārdi: brīvie radikāļi, antioksidants, antioksidanta aktivitāte, kopējā antioksidanta kapacitāte, hemiluminiscence, luminols

Finansējums: šo darbu atbalstīja Krievijas Zinātnes fonds, grants Nr. 14-15-00375.

Pateicības: autori pateicas Andrejam Aleksejevam no Lomonosova Maskavas Valsts universitātes par palīdzību eksperimenta veikšanā. Jārisina sarakste: Džordžs Vladimirovs

Lomonosovska prospekts, d. 31, k. 5, Maskava, Krievija, 119192; [aizsargāts ar e-pastu] Saņemts: 10.03.2016 Pieņemts: 18.03.2016

Organismā radītie brīvie radikāļi izjauc šūnu membrānu struktūru, kas, savukārt, izraisa dažādu patoloģisku stāvokļu attīstību. Radikāļu destruktīvo oksidatīvo efektu novērš organisma antioksidantu aizsardzības sistēma, kurā liela nozīme ir mazmolekulārajiem savienojumiem – radikāļu uztvērējiem (slazdiem). Viens no antioksidantu avotiem ir ārstniecības augu izejvielas, kā arī uz to bāzes ražoti preparāti, kuru antioksidantu potenciāla izpēte palīdz palielināt to profilaktisko un ārstniecisko iedarbību.

Darbos aplūkotas galvenās metodes antioksidantu noteikšanai, tomēr antioksidantu kā ķīmisko savienojumu definīcija nedod pilnīgu priekšstatu par pētāmā objekta aizsargājošajām īpašībām: tās nosaka ne tikai viena vai otra antioksidanta daudzums. , bet arī pēc katras aktivitātes. Antioksidanta aktivitāte jeb antioksidanta aktivitāte, AOA, ir ātruma konstante antioksidanta reakcijai ar brīvo radikāli (kInH). Ķīmiluminiscences (CL) metode ļauj noteikt kopējo radikāļu daudzumu, ko antioksidanti saistās paraugā (kopējā antioksidanta kapacitāte, TAU), un, izmantojot CL kinētikas matemātiskās modelēšanas metodi, arī ģenēzes veidošanās un reakcijas ātrumu. radikāļi ar antioksidantiem, t.i., AOA.

Visizplatītākā ķīmiskās luminiscences metodes modifikācija kopējās antioksidanta kapacitātes noteikšanai ir balstīta uz luminola izmantošanu kā hemiluminiscences aktivatoru. Hemiluminometra kivetē ievieto paraugu, pievienojot luminolu, ūdeņraža peroksīdu un savienojumu, kas spontānas sadalīšanās (termolīzes) rezultātā spēj radīt radikāļus, piemēram, 2,2"-azobis-(2-amidinopropānu). ) dihidrohlorīds (ABAP):

Molekulārā skābekļa klātbūtnē alkilgrupa R^ veido peroksilgrupu ROO^:

ROO^ + LH2 ^ ROOH + LHv No LH, veidojoties starpvielām (luminola hidroperoksīds un luminola endoperoksīds), elektroniski ierosinātā stāvoklī veidojas luminola oksidācijas galaprodukta aminoftalskābes molekula, kas izstaro fotonu. , un rezultātā tiek novērota hemiluminiscence . CL intensitāte ir proporcionāla fotonu ražošanas ātrumam, kas, savukārt, ir proporcionāls stacionārajai LH koncentrācijai sistēmā. Mijiedarbojoties ar radikāļiem, antioksidanti pārtrauc aprakstīto transformāciju ķēdi un novērš fotona veidošanos.

Termolīzei pakļautie savienojumi nav vienīgais iespējamais radikāļu avots, analizējot parauga antioksidantu spēju ar hemiluminiscences metodi. Alternatīvas ir mārrutku peroksidāze-ūdeņraža peroksīds, hemin-ūdeņraža peroksīds, citohroma c-kardiolipīns-ūdeņraža peroksīds uc Luminola oksidēšanās ar peroksidāzēm reakciju shēma aplūkota Kormjē et al. .

Šo sistēmu CL kinētiskās līknes atspoguļo divus reakcijas posmus: CL intensitātes palielināšanās stadiju un plato stadiju vai pakāpenisku luminiscences samazināšanos, kad

CL intensitāte ir nemainīga vai lēnām samazinās. Rakstā ir aprakstītas divas pieejas kopējās antioksidantu kapacitātes mērīšanai, kas ņem vērā šo līkņu iezīmi. TRAP (kopējā reaktīvā antioksidanta potenciāla) metode ir balstīta uz CL latentuma t mērīšanu, un to var izmantot, lai noteiktu antioksidantus, piemēram, troloksu vai askorbīnskābi: tiem ir raksturīga augsta reakcijas ātruma konstante ar radikāļiem, un šī iemesla dēļ var sauc par spēcīgiem antioksidantiem.. Latentajā periodā notiek to pilnīga oksidēšanās. TAR metode (kopējā antioksidantu reaktivitāte) mēra hemiluminiscences q dzēšanas pakāpi hemiluminiscences līknes plato vai maksimumā:

kur I ir hemiluminiscences intensitāte bez antioksidanta, un 11 ir CL intensitāte antioksidanta klātbūtnē. Šo metodi izmanto, ja sistēma satur pārsvarā vājus antioksidantus ar zemām mijiedarbības ar radikāļiem ātruma konstantēm – daudz zemākām salīdzinājumā ar luminola konstanti.

Antioksidantu darbību raksturo ne tikai t un c rādītāji. Kā redzams no darbiem, antioksidantu, piemēram, urīnskābes hemin-H202-luminola sistēmā vai tokoferola, rutīna un kvercetīna darbību citohroma c-kardiolipīna-H202-luminola sistēmā raksturo maksimālās ātruma izmaiņas. no CL pieauguma (utx). Kā liecina kinētikas matemātiskās modelēšanas rezultāti, šo antioksidantu mijiedarbības ar radikāļiem ātruma konstantu vērtības ir tuvas luminola konstantes vērtībai, tāpēc šādus antioksidantus var saukt par vidēja stipruma antioksidantiem.

Ja pētāmajā materiālā, jo īpaši augu izejvielās, būtu tikai viena veida antioksidanti, tad to saturu varētu raksturot ar vienu no trim iepriekš minētajiem rādītājiem (m, q vai V). Bet augu izejvielas satur dažāda stipruma antioksidantu maisījumu. Lai atrisinātu šo problēmu, daži autori izmantoja ķīmiskās luminiscences gaismas summas izmaiņas noteiktā DE laikā, kas aprēķināta pēc formulas

DE = DE0 - DE,

kur DE0 un DE5 ir CL gaismas summas uz noteiktu laiku? attiecīgi kontroles un testa paraugos. Laikam jābūt pietiekamam, lai visi sistēmā esošie antioksidanti oksidētos, tas ir, lai testa parauga CL līkne sasniegtu kontroles parauga CL līknes līmeni. Pēdējais liecina, ka pētniekiem ir ne tikai jāreģistrē luminiscences gaismas summa, bet arī jāreģistrē CL kinētikas līkne pietiekami ilgu laiku, kas ne vienmēr tiek darīts.

Tā kā visi izmērītie rādītāji ir atkarīgi no instrumenta un mērīšanas apstākļiem, vielas antioksidanta iedarbība pētāmajā sistēmā parasti tiek salīdzināta ar antioksidanta iedarbību, kas tiek ņemta par standartu, piemēram, Trolox.

Lai analizētu augu materiālu kopējo antioksidantu spēju, daudzi autori izmantoja mārrutku peroksidāzes-ūdeņraža peroksīda sistēmu. Darbos, lai novērtētu antioksidantu daudzumu paraugos, tika izmantots CL latentais periods (TRAP metode), bet darbos tika izmantots laukums zem CL attīstības līknes. Taču šie darbi nedod skaidru pamatojumu

viena vai otra parametra izvēle OAU novērtēšanai.

Pētījuma mērķis bija noskaidrot, kā dažāda veida antioksidantu attiecība ietekmē TAU, un modificēt hemiluminiscences metodi tā, lai varētu precīzāk noteikt TAU augu materiālos. Lai to paveiktu, esam sev izvirzījuši vairākus uzdevumus. Pirmkārt, salīdzināt pētāmo objektu CL kinētiku ar trīs veidu standarta antioksidantu (stipru, vidēju un vāju) kinētiku, lai saprastu, kura veida antioksidanti dod galveno ieguldījumu pētāmo objektu TAE. Otrkārt, aprēķināt pētāmo objektu TAE, izmērot CL gaismas summas samazināšanos šo objektu iedarbībā salīdzinājumā ar antioksidanta darbību, kas nodrošina vislielāko ieguldījumu TAE.

MATERIĀLI UN METODES

Pētījuma objekti bija a/s Krasnogorskleksredstva (Krievija) ražotie vilkābeļu, pīlādža un mežrozīšu augļu rūpnieciskie paraugi, kā arī aveņu augļi, kurus autori ievākuši Maskavas reģionā dabiskās augšanas apstākļos un žāvēti temperatūrā 60-80 ° C, līdz tie pārstāj izolēt sulu un spiediena deformācijas.

Reaģenti antioksidantu kapacitātes analīzei ar hemiluminiscences metodi bija: KH2PO4, 20 mM buferšķīdums (pH 7,4); peroksidāze no mārrutku saknēm (aktivitāte 112 U/mg, M = 44 173,9), 1 mM ūdens šķīdums; luminols (5-amino-1,2,3,4-tetrahidro-1,4-ftalazindions, 3-aminoftalskābes hidrazīds, M=177,11), 1 mM ūdens šķīdums; ūdeņraža peroksīds (H2O2, M = 34,01), 1 mM ūdens šķīdums; antioksidantu šķīdumi (askorbīnskābe, kvercetīns, tokoferols). Visus reaģentus ražoja Sigma Aldrich (ASV).

Kopējā antioksidanta kapacitāte tika noteikta, reģistrējot hemiluminiscenci ar Lum-100 ķīmijluminometru (DISoft, Krievija), izmantojot PowerGraph 3.3 programmatūru. Lai noteiktu TAU augu izejvielās, 40 µl luminola koncentrācijā 1 mM, 40 µl mārrutku peroksidāzes koncentrācijā 0,1 µM, no 10 līdz 50 µl novārījuma vai uzlējuma (atkarībā no koncentrācijas) un fosfātu buferšķīdumu. tādā daudzumā, kas nepieciešams, lai kopējais parauga tilpums sasniegtu 1 ml. Kivete tika uzstādīta ierīcē un CL tika ierakstīta, novērojot fona signālu. Pēc 48 s pēc fona signāla reģistrācijas kivetei pievienoja 100 μl H2O2 koncentrācijā 1 mM, un CL reģistrāciju turpināja 10 minūtes. Tika sagatavoti četri paraugi ar atšķirīgu katra augu objekta koncentrāciju. CL tika reģistrēts arī askorbīnskābes, kvercetīna un tokoferola šķīdumiem piecās dažādās koncentrācijās katram antioksidantam. Pēc tam novārījumu un uzlējumu paraugu TAU tika pārrēķināts kvercetīnam.

sasniedza plato, kas norādīja uz pilnīgu antioksidantu iznīcināšanu sistēmā. Pētīto paraugu atšķaidījumi un standarta antioksidantu šķīdumu koncentrācijas (norādītas attēlu parakstos) tika atlasītas tā, lai visas CL kinētiskās līknes tiktu mērītas pie vienādas instrumenta jutības.

Antioksidanta kapacitāte tika aprēķināta no laukuma (AS) izmaiņām zem hemiluminiscences kinētiskās līknes (gaismas summa), pievienojot vielu, kas satur antioksidantu. Lai to izdarītu, sistēmai bez antioksidanta mēs aprēķinājām S0 un no tā atņēmām laukumu SS, kas raksturo sistēmu, kurai tika pievienots antioksidants. AS vērtība ir atkarīga no hemiluminometra jutības un mērīšanas apstākļiem. Attiecība AS/C ■ V (kur C ir pētāmā bioloģiskā materiāla koncentrācija kivetē, g/l un V ir kivetes tilpums, l) izsaka 1 g pētāmā materiāla antioksidanta kapacitāti, t.i. , augu materiāls.

Līdzīgi tika aprēķināta antioksidanta kapacitāte ASa standarta antioksidanta, piemēram, kvercetīna šķīdumam, kas ievietots vienā un tajā pašā reakcijas maisījuma tilpumā. Attiecība AS/CÄ ■ V (kur CA ir antioksidanta svara koncentrācija kivetē, g/l) izsaka antioksidanta spēju 1 g antioksidanta.

Katram standarta antioksidantam tika reģistrēts signāls no vairāku koncentrāciju šķīdumiem, lai pārliecinātos, ka aprēķini ir veikti lineāras attiecības robežās un iegūtie rezultāti ir reproducējami. Patiešām, tika iegūta signāla lineārā atkarība (ASa = kA ■ CA) no koncentrācijas, no kuras tika aprēķināts stehiometriskais koeficients kA. Saskaņā ar Fišera kritēriju standarta antioksidantiem iegūtās kA vērtības ir statistiski nozīmīgas ar varbūtību 0,975. Tālāk katram no četriem augu paraugiem tika reģistrēts signāls no četrām koncentrācijām, un visiem paraugiem tika iegūta signāla lineārā atkarība no koncentrācijas (AS = k ■ C), no kuras tika aprēķināts stehiometriskais koeficients k. Ar varbūtību 0,975 (Fišera tests) augu paraugiem iegūtās k vērtības ir statistiski nozīmīgas. Augu materiāla kopējā antioksidanta kapacitāte standarta antioksidanta svara izteiksmē (mg%) tika noteikta pēc formulas

OAU = k ■ 105. k

Vērtības tika uzrādītas kā vidējā aritmētiskā ± standarta novirze (M ± 5) pie p<0,05.

PĒTĪJUMA REZULTĀTI

Ķīmiluminiscences kinētikas izpēte nātrija askorbāta klātbūtnē (1. att.) parādīja, ka šim antioksidantam raksturīgs latentais periods, kad CL ir gandrīz pilnībā nomākts. Tās ilgums ir proporcionāls antioksidanta daudzumam sistēmā. Šajā gadījumā nemainās ne CL līkņu slīpums, ne CL intensitāte plato. Tas izskaidrojams ar to, ka askorbīnskābe ir spēcīgs antioksidants, kas pārtver visus sistēmā izveidotos radikāļus, arī luminola radikāļus, un CL neattīstās, kamēr nav oksidēts viss askorbāts.

Tokoferola darbība (2. att.) izpaudās ar CL intensitātes samazināšanos plato, kas raksturīgs vājiem antioksidantiem, lai gan tokoferols tiek uzskatīts par vienu no visvairāk.

spēcīgi antioksidanti. Iespējams, šī neatbilstība ir saistīta ar to, ka mūsu eksperimentā brīvie radikāļi atradās ūdens šķīdumā, savukārt tokoferola darbība parasti tiek pētīta nepolārā vidē. Pētījumā, kur citohroma c komplekss ar kardiolipīnu kalpoja par radikāļu avotu un reakcija ar luminolu norisinājās šajā kompleksā, tokoferolam bija vidēja stipruma antioksidanta īpašības.

Izpētot dažādu kvercetīna koncentrāciju ietekmi uz mūsu sistēmu (3. att.) un salīdzinot tā un nātrija askorbāta un tokoferola kinētiskās līknes, var atzīmēt, ka kvercetīna galvenā iedarbība izpaužas kā kvercetīna slīpuma izmaiņas. līknes, t.i., CL attīstības ātrums, kas raksturīgs mēreniem antioksidantiem.

CL līknes visiem pētītajiem novārījumiem (4. att.) atgādina kvercetīna līknes ar nelielu CL intensitātes samazināšanos beigās, t.i., sasniedzot.

Laiks, min

Rīsi. 1. Nātrija askorbāta ietekme uz hemiluminiscences kinētiku

Sistēmas komponentu koncentrācijas: luminols - 40 μM, mārrutku peroksidāze - 4 nM, ūdeņraža peroksīds - 100 μM. Līknes: 1 - kontroles paraugs; 2 - 0,05 μM; 3 - 0,10 μM; 4 - 0,15 μM; 5 - 0,2 μM; 6 - 0,25 μM nātrija askorbāts.

plato. Kā redzams darbā, šāda uzvedība ir raksturīga vidēja stipruma antioksidantiem, kas mūsu gadījumā ietver polifenolus – flavonoīdus un tanīnus. Aveņu augļu uzlējumam (4. att., D) ir novērojama hemiluminiscences samazināšanās plato līmenī, kas raksturīga vājiem antioksidantiem, kas šajā gadījumā ir tokoferols. Runājot par kvercetīnu un tokoferolu, aveņu augļu infūzija satur 4,7 ± 0,9 µmol/g kvercetīna un 11,9 ± 0,8 µmol/g tokoferola.

Salīdzinot četru pētīto augu materiālu ūdens ekstraktu dažādām koncentrācijām iegūtās hemiluminiscences līknes, tika parādīts, ka vidējo un vājo antioksidantu devums kopējā paraugu antioksidanta kapacitātē samazinājās šādā secībā: aveņu augļu infūzija (att. 4, D), mežrozīšu augļu novārījumu (4. att., C), pīlādžu augļu novārījumu (4. att., A), vilkābeles augļu novārījumu (4. att., B). AS vērtības attiecībā uz pētāmās vielas koncentrāciju C kivetē un kopējās antioksidanta kapacitātes vērtības kvercetīna izteiksmē ir parādītas tabulā.

REZULTĀTU APSPRIEŠANA

Eksperimentu laikā iegūtie dati un uz to pamata aprēķinātās pētāmo objektu TAU vērtības tika salīdzinātas ar galveno antioksidantu saturu tajos, kas noteikts, izmantojot ķīmiskās analīzes metodes. Neskatoties uz to, ka pozitīva korelācija starp kopējo antioksidantu daudzumu un TAU dažādos objektos ir nenoliedzama, starp šiem rādītājiem ir manāmas atšķirības. Piemēram, ja ņemam flavonoīdu, tanīnu un askorbīnskābes satura summu, tad tas izrādās vairāk par aprēķināto TAU visiem pētītajiem objektiem, izņemot vilkābeles augļu novārījumu (tabula).

Citi pētnieki arī ir parādījuši, ka ķīmiskās analīzes rezultāti un TAU vērtība, kas noteikta ar hemiluminiscences metodi, bieži nesakrīt. Darbā noteikta kopējā antioksidanta kapacitāte

46 Laiks, min

Es" "h chi----.

Rīsi. 2. Tokoferola ietekme uz hemiluminiscences kinētiku

Sistēmas komponentu koncentrācijas: luminols - 40 μM, mārrutku peroksidāze - 4 nM, ūdeņraža peroksīds - 100 μM. Līknes: 1 - kontroles paraugs; 2 - 0,01 μM; 3 - 0,025 μM; 4 - 0,06 μM; 5 - 0,1 μM; 6 - 0,2 μM tokoferols.

46 Laiks, min

Rīsi. 3. att. Kvercetīna ietekme uz hemiluminiscences kinētiku Sistēmas komponentu koncentrācijas: luminols - 40 μM, mārrutku peroksidāze - 4 nM, ūdeņraža peroksīds - 100 μM. Līknes: 1 - kontroles paraugs; 2 - 0,02 μM; 3 - 0,03 μM; 4 - 0,04 μM; 5 - 0,05 μM; 6 - 0,06 μM kvercetīns.

Laiks, min

46 Laiks, min

120 I 100 80 \ 60 40 20

46 Laiks, min

Rīsi. 4. att. Pīlādžu augļu (A), vilkābeles (B), mežrozīšu (C) un aveņu augļu uzlējuma (D) novārījumu ietekme uz hemiluminiscences kinētiku. (A) Līknes: 1 - kontroles paraugs; 2 - 0,002 g/l; 3 - 0,004 g/l; 4 - 0,006 g/l; 5 - 0,008 g/l pīlādžu augļu novārījums. (B) Līknes: 1 - kontroles paraugs; 2 - 0,005 g/l; 3 - 0,0075 g/l; 4 - 0,01 g/l; 5 - 0,0125 g/l vilkābeles augļu novārījums. (C) Līknes: 1 - kontroles paraugs; 2 - 0,001 g/l; 3 - 0,0015 g/l; 4 - 0,002 g/l; 5 - 0,0025 g/l mežrozīšu novārījums. (D) Līknes: 1 - kontroles paraugs; 2 - 0,001 g/l; 3 - 0,003 g/l; 4 - 0,004 g/l; 5 - 0,005 g/l aveņu uzlējums.

sistēmā peroksidāzes-luminola-ūdeņraža peroksīds korelē ar triterpēna savienojumu saturu. Taču šo pašu autoru darbos, kuros pētījuma objekts bija cits augs, korelācija starp TAU un kādas vielu grupas, tajā skaitā flavonoīdu, saturu netika novērota.

Šīs neatbilstības ir saistītas ar vismaz trim faktoriem. Pirmkārt, svarīga ir antioksidantu aktivitāte, t.i., to mijiedarbības ātrums ar radikāļiem, kas dažādiem antioksidantiem, kas veido augu paraugu, ir atšķirīgs. Pēc Izmailova teiktā, meksidola, tokoferola un kvercetīna attiecīgo reakciju ātruma konstantes ir saistītas kā 0,04: 2: 60. Otrkārt, katra antioksidanta molekula, nonākot ķīmiskā reakcijā, var pārtvert dažādu skaitu radikāļu. Saskaņā ar darbu kvercetīns, urīnskābe un askorbīnskābe pārtvēra attiecīgi 3,6 ± 0,1, 1,4 ± 0,1 un 0,5 ± 0,2 radikāļus uz vienu reaģējušo antioksidanta molekulu (izmantota gemin-H202-luminola sistēma). Treškārt, pētījuma rezultātus varētu ietekmēt peroksidāzes aktivitātes klātbūtne pašu augu paraugos, tāpat kā darbā, kā arī kalcija klātbūtne paraugos, kas, kā redzams darbā, spēj palielināt. mārrutku peroksidāzes aktivitāte noteiktos apstākļos. Tas parasti rada vairāk

augstāka CL intensitāte plato nekā kontroles līknēs, ko mēs tomēr neievērojām.

Vēl svarīgāks ir antioksidanta stehiometriskais koeficients. To pārtverto radikāļu skaits n ir vienāds ar

kur p ir stehiometriskais koeficients, un Am ir antioksidanta koncentrācijas izmaiņas mērījuma laikā, mūsu gadījumā testējamās vielas sākotnējā koncentrācija testa paraugā.

Luminiscences gaismas summas atšķirība bez antioksidanta un tā klātbūtnē ir proporcionāla n. Kopējais pārtverto radikāļu skaits ir n = Y.p. m,

kur ir konkrēta antioksidanta stehiometriskais koeficients, un m ir tā koncentrācija izmaiņu laikā

Pētījuma objekts Flavonoīdi, mg%* Tanīni, mg%* Askorbīnskābe, mg%* AS/C ■ 10-8, arb. vienības OAU, mg% kvercetīns

Pīlādžu augļu novārījums 8,87 ± 0,01 210,00 ± 10,00 0,67 ± 0,02 7,13 ± 0,96 56,53 ± 7,61

Mežrozīšu novārījums 4,66 ± 0,04 850,00 ± 20,00 3,70 ± 0,12 16,60 ± 3,40 131,63 ± 27,26

Vilkābeļu augļu novārījums 3,01 ± 0,06 12,00 ± 3,00 0,23 ± 0,002 3,18 ± 0,29 25,20 ± 2,32

Žāvētu aveņu uzlējums 90,00 ± 4,00 40,00 ± 20,00 3,91 ± 0,08 6,65 ± 1,21 52,69 ± 9,56

Piezīme: * - literatūras dati, . AS - gaismas summas izmaiņas paraugam, rel. vienības, C - parauga koncentrācija kivetē, g/l. Aprēķinātās vērtības ir ticamas p<0,05. Число измерений для каждого образца - четыре.

rēnijs. Kopējais pārtverto radikāļu skaits acīmredzami nav vienāds ar kopējo antioksidantu daudzumu, jo koeficienti pt ne tikai nav vienādi ar vienotību, bet arī būtiski atšķiras dažādiem antioksidantiem.

Vērtība n ir proporcionāla gaismas summu starpībai, kas noteiktā laikā izmērīta starp paraugu, kas satur antioksidantu, un kontroles paraugu, kas nesatur antioksidantus:

kur k ir koeficients, kas ir nemainīgs tādos pašos mērīšanas apstākļos.

Apstākļi, kurus izvēlējāmies, lai novērtētu augu izejvielu kopējo antioksidantu kapacitāti, reģistrējot hemiluminiscences kinētiku sistēmā, kas sastāv no mārrutku peroksidāzes, ūdeņraža peroksīda un luminola (komponentu koncentrācijas ir attiecīgi 4 nM, 100 μM un 40 μM; 20 mM fosfāta buferšķīdums, pH 7,4),

nodrošināja spēcīgu antioksidantu (askorbīnskābes) un mērenu antioksidantu (kvercetīna) oksidēšanos 10 min. Šāds mērījumu ilgums ir ērts un nodrošina nepieciešamo mērījumu kvalitāti.

Literatūra

1. Proskurnina E. V., Vladimirov Yu. A. Brīvie radikāļi kā regulējošo un patoloģisko procesu dalībnieki. In: Grigorjevs A. I., Vladimirovs Yu. A., redaktori. Fundamentālās zinātnes – medicīna. Biophys. medus. tehn. Maskava: MAKS Press; 2015. 1. sēj. lpp. 38-71.

3. Khasanov V. V., Ryzhova G. L., Maltseva E. V. Antioksidantu izpētes metodes. Chem. rast. izejvielas. 2004. gads; (3): 63-75.

4. Vasiļjevs R. F., Kančeva V. D., Fedorova G. F., Batovska D. I., Trofimovs A. V. Halkonu antioksidanta aktivitāte. Reaģentu un starpproduktu reaktivitātes hemiluminiscences noteikšana un enerģiju un struktūru kvantu ķīmiskais aprēķins. Kinētika un katalīze. 2010. gads; 51(4): 533-41.

6. Fedorova GF, Trofimovs AV, Vasil "ev RF, Veprintsev TL. Peroxy-

radikāļu izraisīta hemiluminiscence: mehāniskā daudzveidība un antioksidantu testa pamati. Arkivoc. 2007. gads; 8:163-215.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. Antiradikālās kapacitātes novērtējums ar H2O2-hemīna izraisītu luminola hemiluminiscenci. J Agric Food Chem. 2003. gada 3. decembris; 51 (25): 7481-8.

9. Vladimirovs Yu. A., Proskurnina E. V. Brīvie radikāļi un šūnu ķīmiskā luminiscence. Panākumi biol. chem. 2009. gads; 49:341-88.

10. Vladimirovs Yu. A., Proskurnina E. V., Izmailov D. Yu. Kinētiskā ķīmijluminiscence kā metode brīvo radikāļu reakciju pētīšanai. Biofizika. 2011. gads; 56(6): 1081-90.

11. Izmailovs D. Yu., Demin E. M., Vladimirov Yu. A. Antioksidantu aktivitātes noteikšana, mērot hemiluminiscences kinētiku. Fotobioloģija un fotomedicīna. 2011. gads; 7(2):70-6.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Luminola luminiscence, ko izraisa 2,2"-Azo-bis(2-amidinopropāna) termolīze. Bezmaksas

Radic Res Commun. 1992. gads; 17(5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Par luminola luminiscences slāpēšanas izmantošanu SOD aktivitātes novērtēšanai. Bezmaksas Radic Biol Med. 1994. gada jūnijs; 16(6): 833-7.

15. Lissi EA, Salim-Hanna M, Pascual C, Del Castillo MD. Kopējā antioksidantu potenciāla (TRAP) un kopējās antioksidantu reaktivitātes novērtējums no luminola pastiprinātas hemiluminiscences mērījumiem. Bezmaksas Radic Biol Med. 1995. gada februāris; 18(2):153-8.

17. Cormier MJ, Prichard PM. Luminola luminiscējošās peroksidācijas mehānisma izpēte ar apturētas plūsmas metodēm. J Biol Chem. 1968. gada 25. septembris; 243(18): 4706-14.

21. Alekseev A. V., Proskurnina E. V., Vladimirov Yu. A. Antioksidantu noteikšana ar aktivētu hemiluminiscenci, izmantojot 2,2'-azo-bis(2-amidinopropanu). Maskavas Valsts universitātes biļetens. Ser. 2. Khim. 2012; 53 ( 3): 187-93.

24. PSRS Veselības ministrija PSRS Valsts farmakopeja XI izd. Izdevums. 2 “Vispārīgās analīzes metodes. Ārstniecības augu materiāli". M.: Medicīna; 1987. lpp. 147-8.

25. Sergunova E. V., Sorokina A. A., Kornyushina M. A. Mežrozīšu ekstrakta preparātu izpēte. Aptieka. 2012. gads; (2): 14-6.

26. Sergunova E. V., Sorokina A. A., Avrach A. S. Vilkābeļu augļu izpēte dažādos saglabāšanas un ūdens ieguves veidos. Aptieka. 2010. gads; (5): 16-8.

27. Avrach A. S., Sergunova E. V., Kuksova Ya. V. Augļu bioloģiski aktīvās vielas un parasto aveņu ūdens ekstrakti. Aptieka. 2014. gads; (1): 8-10.

28. Avrach A. S., Samylina I. A., Sergunova E. V. Vilkābeļu augļu bioloģiski aktīvo vielu izpēte - izejvielas homeopātisko matricu tinktūru pagatavošanai. Sestdien zinātnisks tr. Pamatojoties uz XXIV Mosk materiāliem. starpt. homeopāts. konf. "Homeopātiskās metodes attīstība mūsdienu medicīnā"; 2014. gada 24.-25. janvāris; Maskava. M.; 2014. lpp. 146-7.

29. Sergunova E. V., Sorokina A. A. Bioloģiski aktīvo vielu sastāva izpēte dažādu konservēšanas metožu ārstniecības augu materiālos. Sestdien tēzes, kuru pamatā ir XX Ross. nat. kongr. "Cilvēks un medicīna"; 2013. gada 15.-19. aprīlis; Maskava. Maskava: EkoOnis; 2013. lpp. 184-90.

30. Aleksandrova E. Yu., Orlova M. A., Neiman P. L. Peroksidāzes aktivitātes izpēte mārrutku sakneņu un sakņu ekstraktos un tās stabilitāte pret dažādām ietekmēm. Vestn. Maskavas Valsts universitāte. Ser. 2. Chem. 2006. gads; 47(5):350-2.

1. Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Free radikaly kak uchastniki regulyatornykh i patologicheskikh protsessov. In: Grigor "ev AI, Vladimirov YuA, editors. Fundamental" nye nauki - meditsine. Biofizicheskie meditsinskie technologii. Maskava: MAKS Press; 2015.v. 1. lpp. 38-71. krievu valoda.

2. Chanda S, Dave R. In vitro modeļi antioksidantu aktivitātes novērtēšanai un daži ārstniecības augi, kam piemīt antioksidanta īpašības: pārskats. Afr J Microbiol Res. 2009. gada decembris; 3(13): 981-96.

3. Khasanov VV, Ryzhova GL, Mal "tseva EV. Metody issledovaniya antioksidantov. Himija Rastitel "nogo Syr" ja. 2004; (3): 63-75. Krievu val.

4. Vasil "ev RF, K" "ncheva VD, Fedorova GF, B" "tovska DI, Trofimov AV. Antioksidantnaya aktivnost" halkonovs. Khemilyuminestsentnoe opredelenie reaktsionnoi sposobnosti i kvantovo-khimicheskii raschet energii i stroeniya reagentov i intermediatov. Kinētika un katalīze. 2010. gads; 51(4): 533-41. krievu valoda.

5. Slavova-Kazakova AK, Angelova SE, Veprintsev TL, Denev P, Fabbri D, Dettori MA u.c. Ar kurkumīnu saistīto savienojumu antioksidantu potenciāls pētīts ar hemiluminiscences kinētiku, ķēdes pārraušanas efektivitāti, attīrīšanas aktivitāti (ORAC) un DFT aprēķiniem. Beilstein J Org Chem. 2015. gada 11. augusts; 11:1398-411.

6. Fedorova GF, Trofimov AV, Vasil'ev RF, Veprintsev TL. Peroksi-radikāļu mediētā ķīmiluminiscence: mehāniskā daudzveidība un antioksidantu pārbaudes pamati. Arkivoc. 2007; 8: 163-215.

7. Fedorova GF, Menshov VA, Trofimov AV, Vasil'ev RF. Vienkāršs ķīmiskās luminiscences tests augu lipīdu antioksidatīvajām īpašībām: pamati un ilustratīvi piemēri. Analītiķis, 2009. gada oktobris, 134 (10): 2128-34.

8. Bastos EL, Romoff P, Eckert CR, Baader WJ. Antiradikālās kapacitātes novērtējums ar H2O2-hemīna izraisītu luminolu

9. Vladimirov YuA, Proskurnina EV. Bezmaksas radikaly i kletochnaya khemilyuminestsentsiya. Usp Biol Khim. 2009. gads; 49:341-88. krievu valoda.

10. Vladimirov YuA, Proskurnina EV, Izmailov DYu. Kineticheskaya khemilyuminestsentsiya as metod izucheniya reaktsii svobodnykh radikalov. biofizika. 2011. gads; 56(6): 1081-90. krievu valoda.

11. Izmailovs Dju, Demins EM, Vladimirovs YuA. Opredelenie aktivnosti antioksidantov metodom izmereniya kinetiki khemilyuminestsen-tsii. Fotobioloģija un fotomedicīna. 2011. gads; 7(2):70-6. krievu valoda.

12. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Luminola luminiscence, ko izraisa 2,2"-Azo-bis(2-amidinopropāna) termolīze. Free Radic Res Commun. 1992; 17 (5): 299-311.

13. Lissi EA, Pascual C, Del Castillo MD. Par luminola luminiscences slāpēšanas izmantošanu SOD aktivitātes novērtēšanai. Bezmaksas Radic Biol Med. 1994. gada jūnijs; 16(6): 833-7.

14. Lissi EA, Escobar J, Pascual C, Del Castillo MD, Schmitt TH, Di Mascio P. Redzama chemiluminescence, kas saistīta ar reakciju starp methemoglobīnu vai oksihemoglobīnu ar ūdeņraža peroksīdu. Photochem Photobiol. 1994. gada novembris; 60(5):405-11.

16. Landi-Librandi AP, de Oliveira CA, Azzolini AE, Kabeya LM, Del Ciampo JO, Bentley MV u.c. Liposomu flavonolu antioksidantu aktivitātes novērtējums in vitro ar HRP-H2O2-luminola sistēmu. J Mikrokapsula. 2011. gads; 28(4):258-67.

17. Cormier MJ, Prichard PM. Mehānisma izpēte

luminola luminiscējošo peroksidāciju ar apturētas plūsmas metodēm. J Biol Chem. 1968. gada 25. septembris; 243(18): 4706-14.

18. Chang CL, Lin CS, Lai GH. Fitoķīmiskās īpašības, brīvo radikāļu attīrīšanas aktivitātes un piecu ārstniecības augu ekstraktu neiroaizsardzība. Evid Based Complement Alternatīvā Med. 2012. gads; 2012: 984295. doi: 10.1155/2012/984295. Epub 2011, 10. augusts.

19. Chang CL, Lin CS. Terminalia chebula Retzius ekstraktu fitoķīmiskais sastāvs, antioksidanta aktivitāte un neiroprotektīvais efekts. Evid Based Complement Alternatīvā Med. 2012. gads; 2012: 125247. doi: 10.1155/2012/125247. Epub 2011, 5. jūlijs.

20. Georgetti SR, Casagrande R, Di Mambro VM, Azzolini AE, Fonseca MJ. Dažādu flavonoīdu antioksidantu aktivitātes novērtējums ar hemiluminiscences metodi. AAPS PharmSci. 2003. gads; 5(2):111-5.

21. Aleksejevs AV, Proskurnina EV, Vladimirov YuA. Opredelenie antioksidantu metode aktivirovannoi khemilyuminestsentsii s ispol "zovaniem 2.2" -azo-bis (2-amidinopropana). Maskavas universitātes ķīmijas biļetens. 2012. gads; 53(3): 187-93. krievu valoda.

22. Pogacnik L, Ulrih NP. Optimizētas hemiluminiscences testa pielietošana augu ekstraktu antioksidantu kapacitātes noteikšanai. Luminiscence. 2012. gada novembris–decembris; 27(6):505-10.

23. Saleh L, Plieth C. Kopējais zemas molekulmasas antioksidantu daudzums kā kopsavilkuma parametrs, kas kvantitatīvi noteikts bioloģiskajos paraugos ar ķīmijluminiscences inhibīcijas testu. Nat protokols. 2010. gada septembris; 5(10): 1627-34.

24. Ministrstvo zdravookhraneniya SSSR. Gosudarsvennaya farmakopeya SSSR. 11. izd. Iss. 2. "Obshchie metody analīze.

Lekarstvennoe rastitel "noe syr" e", Maskava: Medltsina, 1987, 147.-8.lpp. Krievu valoda.

25. Sergunova EV, Sorokina AA, Kornyushina MA. Izuchenie ekstraktsionnykh preparatov shipovnika. Aptieka. 2012. gads; (2): 14-6. krievu valoda.

26. Sergunova EV, Sorokina AA, Avrach AS. Izuchenie plodov boyaryshnika razlichnykh sposobov konservatsii i vodnykh izvlechenii. Farmatsia. 2010. gads; (5): 16-8. krievu valoda.

27. Avrach AS, Sergunova EV, Kuksova YaV. Biologicheski aktivnye veshchestva plodov i vodnykh izvlechenii maliny obyknovennoi. Farmatsia. 2014. gads; (1): 8-10. krievu valoda.

28. Avrach AS, Samylina IA, Sergunova EV. M. Izuchenie biologicheski aktivnykh veshchestv plodov boyaryshnika - syr "ya dlya prigotovleniya nastoek gomeopaticheskikh matrichnykh. Proceedings of the 14th Moscow International Homeopathic Conference "Razvitie gomeopaticheskogo metoda v. Moscow. 2. Jan.

29. Sergunova EV, Sorokina AA. Izuchenie sostava biologicheski aktivnykh veshchestv v lekarstvennom rastitel "nom syr" e razlichnykh sposobov konservatsii. Krievijas 20. nacionālā kongresa "Chelovek i lekarstvo" materiāli; 2013. gada 1519. aprīlis; Maskava. Maskava: EkOOnis; 2013. lpp. 184-90. krievu valoda.

30. Aleksandrova EYu, Orlova MA, Neiman PL. Izuchenie peroksidaznoi aktivnosti v ekstraktakh iz kornevishcha i kornei khrena i ee stabil "nosti k razlichnym vozdeistviyam. Moscow University Chemistry Bulletin. 2006; 47 (5): 350-2. Russian.

Arī par tēmu

Zīlēšana saderinātajam: efektīvas un precīzas metodes Zīlēšana pirms gulētiešanas saderinātajam

Garda truša gatavošanas smalkumi vīnā

Mājas maize ar cukini un sīpoliem

Pīrāgi ar sirdi recepte cepeškrāsnī

Pieci mīti par radošiem cilvēkiem